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高純總RNA提取試劑盒

本試劑盒是基于特殊優(yōu)化的裂解液 RNApure 和 RNA 吸附柱的柱式總 RNA 提取試 劑盒，裂解液充分裂解并勻質(zhì)化樣本，采用*特的硅基質(zhì)膜吸附技術(shù)，通過離心吸附柱 在高鹽狀態(tài)下高效專一的結(jié)合溶液中的 RNA，同時***限度的有效除去蛋白質(zhì)、無機鹽 離子及有機雜質(zhì)等；可從動物組織、植物材料、各種微生物及培養(yǎng)細(xì)胞等樣品中快速提 取總 RNA，每次可處理 30-50mg 組織或 5×106細(xì)胞，可同時處理多個不同樣品。本試劑 盒提取得到的 RNA可直接應(yīng)用于 RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、體外翻譯等實驗。

自備試劑

氯仿(新開封或提取 RNA 專用)、無水乙醇。

操作步驟

1．各種材料的處理

1）植物組織：取新鮮植物組織在液氮中充分研磨或?qū)⒅参锝M織剪碎后直接在 RNApure中迅速研磨，每 30-50 mg 組織加入 1ml RNApure，渦旋混勻。注意：樣品體積一般不要超過 RNApure 體積的 10%。

2）動物組織：取新鮮或-70℃凍存的動物組織盡量剪碎，每 30-50mg 組織加入 1ml  RNApure，勻漿儀進(jìn)行勻漿處理?；蛟谝旱醒心ズ蠹尤?1ml RNApure 混勻。注意：樣品體積一般不要超過 RNApure 體積的 10%。

3）單層培養(yǎng)細(xì)胞：吸去培養(yǎng)液，可直接在培養(yǎng)板中加入適量 RNApure（每 10cm2面積需要 1ml RNApure），用取樣器反復(fù)吹打使細(xì)胞裂解。也可用胰蛋白酶處理后，將細(xì)胞溶液轉(zhuǎn)移至 Rnase-free 的離心管中，13000×g 離心 5 分鐘，收集細(xì)胞沉淀，仔細(xì)吸除所有上清，加入 1ml RNApure 混勻。

注意：

a. 收集細(xì)胞數(shù)量不要超過 1×10?。

b. RNApure 加量根據(jù)培養(yǎng)板面積決定，不是由細(xì)胞數(shù)決定。如果 RNApure 加量不足，可能導(dǎo)致提取的 RNA 中有 DNA 污染。

c. 收集細(xì)胞時一定要將細(xì)胞培養(yǎng)液去除干凈，否則會導(dǎo)致裂解不全，造成 RNA 的產(chǎn)量降低。

4）細(xì)胞懸液：離心收集細(xì)胞。每 5×10?-1×10?動物、植物和酵母細(xì)胞或每 10?細(xì)菌細(xì)胞加入 1 ml RNApure。

注意：

a. 加入 RNApure 前不要洗滌細(xì)胞，以免 RNA 降解。

b. 一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞可能需要勻漿儀或液氮研磨處理。

5）血液處理：直接取新鮮的血液，加入 3 倍體積 RNApure（推薦 0.25ml 全血加入 0.75mlRNApure），充分振蕩混勻。

6）可選步驟：對于蛋白、脂肪、多糖或胞外物質(zhì)含量高的樣品，如肌肉組織、脂肪組

規(guī)格 100 次

適用范圍:

RNA 提取

試劑盒組分：

RNApure Reagent 100ml

Buffer RW1 40ml*2

Buffer RW2 11ml*2

Rnase-free Water 10ml

Rnase-free吸附柱RB 50個*2

保存條件：

RNApure Reagent 4°C

其它組分 室溫

RNA 純化組織或植物的塊莖，可以在勻漿處理后 13,000×g 離心 10 分鐘以除去不溶物質(zhì)，此時沉淀中含胞外物質(zhì)、多糖和高分子量的 DNA，而 RNA 存在于上清中。

2．樣品中加入 RNApure 后反復(fù)吹打幾次，使樣本充分裂解。室溫放置 5 分鐘，使蛋白核酸復(fù)合物全分離。

3．以每 1ml RNApure 加入 200ul 氯仿的比例加入氯仿，蓋好管蓋，劇烈振蕩 15 秒，室溫放置 2 分鐘。

4．13,000×g 離心 10 分鐘，此時樣品分為三層：有機相，中間層和上層無色水相，RNA主要在上層水相中，將上層水相移到一個新的 Rnase-free 離心管（自備）中。

5．在得到的水相溶液中加入 0.5 倍無水乙醇，顛倒混勻。

6．將上步所得溶液全部加入到已裝入收集管的吸附柱 RB 中。若一次不能加完溶液，可分多次轉(zhuǎn)入。13,000×g 離心 30 秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

7．向吸附柱中加入 700ul Buffer RW1，13,000×g 離心 30 秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

8．向吸附柱中加入 500ul Buffer RW2（使用前檢查是否已加入無水乙醇），13,000×g 離心 30 秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

9．重復(fù)步驟 8。

10．13,000×g 離心 2 分鐘，倒掉收集管中廢液。將吸附柱置于室溫數(shù)分鐘，晾干。

注意：這一步目的是將吸附柱中殘余乙醇去除，乙醇?xì)埩魰绊懞罄m(xù)酶促反應(yīng)（酶切、PCR 等）。

11．將吸附柱置于一個新的 Rnase-free 離心管（自備）中，向吸附柱的中間部位加入30-50ul Rnase-free Water，室溫放置 1 分鐘，13,000×g 離心 1 分鐘，收集 RNA 溶液，-70℃保存 RNA，防止降解。

注意：1）Rnase-free Wate 體積不應(yīng)小于 30ul，體積過小影響回收率。

2）如果要提高 RNA 的產(chǎn)量，可用 30-50ul 新的 Rnase-free Water 重復(fù)步驟 11。

3）如果要提高 RNA 濃度，可將得到的溶液重新加入到吸附柱中，重復(fù)步驟 11。

上海牧榮生物科技有限公司

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