MagVigen™ – Streptavidin DNA Capture

MagVigen鏈霉親和素DNA捕獲納米顆?？捎糜谥苯訌娜芤褐胁东@特定的RNA或DNA序列。納米顆粒可以通過鏈霉親和素和生物素之間的高親和力相互作用結合到任何生物素化的DNA上。MagVigen鏈霉親和素DNA捕獲納米顆?？筛咝Щ厥针p鏈和單鏈DNA。短時間的孵育后，DNA產(chǎn)物被納米粒子捕獲。產(chǎn)生的納米顆粒-寡聚物復合物可以通過磁體與樣品的其余部分分離?？梢允褂孟疵摼彌_液從納米顆粒中洗脫保留的基因組材料。

MagVigen鏈霉親和素DNA捕獲納米顆粒能夠從分析樣品(如細胞裂解物、全血)的鹽和其他污染物中純化DNA產(chǎn)物。純化的DNA產(chǎn)物可以通過凝膠電泳、PCR定量和測序進一步分析。

產(chǎn)品內容:

• Cat# 61002: MagVigen鏈霉親和素DNA捕獲納米顆粒

Cat# K61002還包括:

• DNA檢測緩沖液
• 結合緩沖液1
• 結合緩沖液2

所有材料應儲存在4°c下。

保質期:6個月

草案

DNA純化

該方案被優(yōu)化用于從分析樣品(例如細胞裂解物、全血或血漿)中純化生物素化的DNA樣品。

DNA捕獲

制備磁珠再分散緩沖液:

1. 將600μl DNA檢測緩沖液加入1400μl H2O中，制備磁珠再分散緩沖液。

準備清洗緩沖液:

2. 將2.4毫升DNA檢測緩沖液加入17.6毫升H2O中，制備清洗緩沖液。

準備磁珠:

3. 從倉庫中取出MagVigen鏈霉親和素納米顆粒，并將其置于室溫。




4. 使用前渦旋MagVigen鏈霉親和素納米顆粒10-20秒。

對于高達100皮摩爾的生物素化DNA，使用20μl的MagVigen鏈霉親和素納米顆粒。

5. 取出MagVigen鏈霉親和素納米顆粒，放入干凈的1.5毫升反應管中。




6. 使用磁鐵收集MagVigen鏈霉親和素納米顆粒，并去除上清液。

注意: 在微量離心管的側面應該可以看到含有深棕色納米顆粒的透明沉淀物。

7. 將納米顆粒重新懸浮在等體積的磁珠再分散緩沖液中。

雜交反應:

8. 將樣品在95°C下煮沸10分鐘，然后將樣品管放入干冰中5分鐘，然后短暫離心。




9. 按所述順序向DNA樣品中加入DNA檢測緩沖液、結合緩沖液1、生物素化DNA捕獲寡核苷酸、結合緩沖液2。




10. 將樣品在57°C(優(yōu)良溫度應根據(jù)探針寡核苷酸長度和序列進行測試)下孵育2小時。。




11. 將樣品冷卻至室溫。

磁性Pull-Down:

12. 加入MagVigen鏈霉親和素納米顆粒，室溫下在滾筒上孵育1小時。




13. 孵育后，使用磁鐵將捕獲DNA的納米顆粒從溶液中分離出來。




14. 用移液管小心移去上清液，注意不要干擾捕獲DNA的納米顆粒沉淀。




15. 通過將納米顆粒重新懸浮在57℃的溫洗滌緩沖液中，洗滌DNA捕獲的納米顆粒沉淀。




16. 使用磁鐵收集MagVigen鏈霉親和素納米顆粒，并去除上清液。




17. 通過將納米顆粒重新懸浮在室溫的洗滌緩沖液中來洗滌DNA捕獲的納米顆粒沉淀。




18. 使用磁鐵收集MagVigen鏈霉親和素納米顆粒，并去除上清液。

洗脫:

19. 將納米顆粒重新懸浮于10 mM Tris緩沖液中，并保持所需體積。通過在80℃溫育5分鐘進行洗脫。




20. 用磁鐵將納米顆粒從洗脫的DNA中分離出來。




21. 將含有DNA產(chǎn)物的上清液轉移到干凈的試管中。純化的DNA可用于隨后的評估。

使用的試劑示例。可以滴定磁珠數(shù)量以獲得優(yōu)良性能。

MagVigen™ – Streptavidin DNA Capture