jenabioscience:血液DNA制備-溶液試劑盒
Blood DNA Preparation - Solution Kit——基于溶液從全血中純化基因組DNA
Jena Bioscience由Max-Planck-Institute of Molecular Physiology(Dortmund)的一組科學家于1998年成立，利用超過25年的學術知識為100多個國家的研究和行業(yè)客戶開發(fā)創(chuàng)新試劑。
供一般實驗室使用。
運輸:在環(huán)境溫度下裝運
儲存條件:在環(huán)境溫度下儲存
保質期:12個月
描述:
血液DNA制備試劑盒設計用于從全血樣品中方便快速地分離基因組DNA?；谌芤旱南到y(tǒng)最大限度地減少了在基于旋轉柱/過濾的方法中可能存在的DNA斷裂。因為沒有使用苯酚或氯仿，所以它是安全的，并且不會產生任何有害的廢物。
基于溶液的基因組DNA純化試劑盒保證了最小的DNA片段化，并產生最大150 kb的DNA。
預期收益率:
基因組DNA的產量因樣品而異，取決于加工材料的數量、質量和類型。大約的數量。每次制備300 μl全血，可獲得30-50 μg純化的DNA。如果需要更大量的DNA，將制備物放大10倍是容易的。
內容:
紅細胞裂解液
細胞裂解液
蛋白質沉淀溶液
洗滌緩沖液(使用前，按照瓶子上的指示添加96-99 %的乙醇)
DNA水合溶液
由您提供:
異丙醇(異丙醇)> 99 %
96-99 %乙醇
微管1.5或2.0毫升
65℃的加熱塊或水浴
準備程序:
開始前，提供> 99 %的異丙醇(2-丙醇)(不包括在套件中)。
對于S包(100包):將48毫升96-99 %的乙醇(不包含在試劑盒中)添加到清洗緩沖瓶中。
| 緩沖器 | PP-205
100名預科生 | PP-205L
5x 100份準備 |
紅細胞溶解
解決辦法 | 96毫升 | 5x 96毫升 |
細胞溶菌作用
解決辦法 | 32毫升 | 5x 32毫升 |
蛋白質
沉淀溶液 | 11毫升 | 5x 11毫升 |
| 洗滌緩沖液 | 加入48毫升乙醇
(最終體積60毫升) | 加入48毫升乙醇(最終體積為60毫升) |
| DNA水合溶液 | 11毫升 | 5x 11毫升 |
1細胞裂解:
- 用移液管將900 μl紅細胞裂解液移至1.5 ml微管中，加入300 μl全血或骨髓，倒置10次。
- 在室溫下孵育3分鐘，偶爾倒置。請注意:對于制備前1小時內采集的新鮮血液，將孵育時間增加至10分鐘，以確保紅細胞*全溶解。
- 以15，000 g的速度離心30秒
- 用移液管移去上清液，留下可見的細胞沉淀。確保殘留液體不超過20 μl。這是后續(xù)步驟中有效蛋白質和DNA沉淀的關鍵點。
- 用力搖晃試管10秒鐘，使白細胞重新懸浮在殘留液體中。白細胞沉淀應該*全重新懸浮。
- 向重新懸浮的細胞中加入300 μl細胞裂解液，并上下吸取以裂解細胞，直到看不到團塊。
- 對于肝素處理的血液，在65°C下加熱白細胞沉淀10分鐘以促進溶解。
2蛋白質沉淀:
- 向細胞裂解液中加入100 μl蛋白質沉淀溶液。
- 劇烈渦旋20秒鐘以充分混合。應該可以看到沉淀蛋白質的微小顆粒(沒有結塊)。
- 以15，000 g離心1分鐘。
- 沉淀的蛋白質應該形成緊密的黑色顆粒。如果蛋白質沉淀不緊密，重復渦旋，然后在冰上孵育5分鐘，再次離心。
3 DNA沉淀:
- 用移液管將300 μl濃度大于99 %的異丙醇移入干凈的1.5 ml微量管中，并加入上清液。
- 輕輕倒置1分鐘，混合樣品。
- 以15，000 g離心1分鐘。DNA應該是一個白色的小球。
- 在干凈的吸水紙上簡單地丟棄上清液和引流管。
- 加入500 μl洗滌緩沖液，翻轉試管數次，以洗滌DNA沉淀。
- 以15，000 g離心1分鐘。
- 小心丟棄乙醇，并在室溫下干燥約10至15分鐘。
4 DNA水合作用:
- 加入50-100 μl DNA水合溶液。
- 中速渦旋5秒鐘以混合。
- 將樣品在65°C下培養(yǎng)30分鐘，以加速復水。
- 將DNA儲存在4°C。對于長期儲存，將樣品放置在-20°C或-80°C
上海牧榮生物科技有限公司
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