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            技術文章

            茁彩生物|檸檬酸(CA)檢測

            閱讀:906          發(fā)布時間:2023-6-26

            檸檬酸(Citric Acid, CA),又稱枸櫞酸,是一種重要的有機酸,在自然界中分布很廣,天然的檸檬酸存在于植物如檸檬、柑橘、菠蘿等果實和動物的骨骼、肌肉、血液中。很多種水果和蔬菜,尤其是柑橘屬的水果中都含有較多的檸檬酸,特別是檸檬和青檸含有大量檸檬酸。

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            目前,可采用分光光度法檢測檸檬酸(CA)的含量。

            分光光度法是基于物質(zhì)對光的吸收特性進行的。當光線穿過物質(zhì)時,會被物質(zhì)吸收,且吸收程度與物質(zhì)的濃度成正比。因此,通過測量光線通過物質(zhì)時的吸光度,可以確定物質(zhì)的濃度。在 CA 含量檢測中,常用的分光光度法包括比色法、吸光光度法等。

            一、樣品中檸檬酸提?。?/span>

            a. 液體樣品中檸檬酸提取:取 0.1mL 液體加試劑一 0.9mL,充分混勻,11000g/min 4℃離心 10min, 取上清液,待測。

            b. 組織中檸檬酸提取:稱約 0.1g 組織,加入 1mL 試劑一,冰上充分研磨,11000g/min 4℃離心 10min,取上清液,待測。

            c. 線粒體中檸檬酸提取:稱約 0.1g 組織,加入 1mL 試劑一,冰上充分研磨,600g/min,4℃離心5min;取上清至另一 EP 管中,11000g/min,4℃離心 10min,棄上清(此上清液可用于細胞質(zhì)CA 含量測定);向沉淀中加試劑二 200µL,以及試劑三 2µL,充分懸浮溶解,11000g/min,4℃離心 10min,取上清液,待測。

            二、測定:

            1. 分光光度計預熱 30 min 以上,調(diào)節(jié)波長到 545 nm,蒸餾水調(diào)零。

            2. 試劑一置于 30℃水浴中預熱 30min 以上。

            3. 按下圖在 1.5mLEP 管中加入相應試劑

            試劑名稱(µL)

            空白管

            測定管

            標準管

            餾水

            100



            上清液


            100


            標準品



            100

            試劑一

            700

            試劑四

            100

            試劑五

            100

            充分混勻后室溫靜置 30min,于 545nm 測定吸光度,記為 A 空白管、A 測定管、A 標準管。



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