近年來，在質(zhì)量控制檢測方面，制藥技術(shù)有了重大改進(jìn)和進(jìn)步。其中一項(xiàng)檢測是鱟試劑檢測水和最終藥品中的細(xì)菌內(nèi)毒素，內(nèi)毒素是一種有害的熱原。傳統(tǒng)的光度法鱟試劑檢測——包括用于動態(tài)濁度法和動態(tài)顯色法的96孔板檢測——耗時且需要大量手動時間?，F(xiàn)在，通過使用微流控技術(shù)，可以顯著減少液體處理和手動時間，同時減少鱟試劑和樣品量，并且保證合規(guī)性。
傳統(tǒng)的鱟試劑檢測使用96孔板，每個孔具有特定的形狀和吸光度的路徑長度。96孔板的路徑長度根據(jù)制造商或廠商略有不同。這是因?yàn)槠降?6孔板上的孔通常是截頭圓錐體，便于從模具中脫模。1
由于孔的深度和形狀，鱟試劑制造商規(guī)定了每個孔需要多少樣品量和鱟試劑，以保持內(nèi)毒素檢測的1:1比例。動力學(xué)內(nèi)毒素測定依賴于光密度（OD）變化和內(nèi)毒素濃度之間的反比關(guān)系。OD是“用分光光度計(jì)測定的有機(jī)分子懸浮液或溶液在特定波長下吸收的光量"。2
樣品與鱟試劑的比例（1:1）非常重要。大多數(shù)鱟試劑制造商建議96孔板讀數(shù)器和試管讀取器使用100 µL樣品至100 µL鱟試劑。有些鱟試劑使用的樣品和鱟試劑少于100 µL，這些鱟試劑通常在具有較小孔的微孔板中運(yùn)行。然而，1:1的比例仍然保持不變。多年來，已證明這種1:1的比例可以準(zhǔn)確地得出內(nèi)毒素結(jié)果。使用100 µL的樣品和鱟試劑不是法規(guī)或藥典的要求。相反，它是根據(jù)孔板或試管讀取器的孔徑大小、所需的路徑長度和達(dá)到光密度的吸光度，給出使用多少體積（樣品和鱟試劑）才能達(dá)到1:1比例的一項(xiàng)建議。
近年來，鱟試劑檢測出現(xiàn)了新的創(chuàng)新，如Sievers® Eclipse細(xì)菌內(nèi)毒素檢測儀。Eclipse利用微流控技術(shù)和向心力將小體積的液體準(zhǔn)確地輸送到微孔板上的特定部分，從而大大減少了所需的試劑量并簡化了設(shè)置。30多年來，微流控一直是一個蓬勃發(fā)展的研究領(lǐng)域，因?yàn)樗軌驖M足準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)高效、可靠和靈敏的化學(xué)和生物分析需求，而這正是內(nèi)毒素分析所需要的。
向心微流控用于鱟試劑測試
Eclipse微孔板在五個區(qū)域中嵌入了不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品可制成標(biāo)準(zhǔn)曲線，每個濃度的標(biāo)準(zhǔn)品都有陰性對照。有21個樣品區(qū)用戶可以在一個板上運(yùn)行多達(dá)21個樣品，類似于96孔板讀取器。每個樣品區(qū)都含有陽性產(chǎn)品對照的內(nèi)毒素。
由于微流體需要較小的反應(yīng)體積，但不會改變生物化學(xué)結(jié)構(gòu)和特性，因此，將Eclipse微流控技術(shù)設(shè)計(jì)為使用比典型方法更少的鱟試劑，同時保證合規(guī)性。Eclipse的光密度是用比爾定律計(jì)算出來的。比爾定律，也稱為比爾-朗伯定律，指出“化學(xué)溶液的濃度與其對光的吸收成正比。"3由于微流體的性質(zhì)，包括流體通道和樣品/鱟試劑室，Eclipse只需要1 mL鱟試劑，并確保每次測定的樣品與鱟試劑比例為1:1。
在Eclipse的整個開發(fā)過程中進(jìn)行了廣泛的測試，以確保與96孔板讀取器的性能相當(dāng)?！睹绹幍洹吩?lt;1225>一章中概述了驗(yàn)證分析方法時需要考慮的參數(shù)。Eclipse的系統(tǒng)性能是通過測定USP <1225>中列出的不同參數(shù)來評估的。
多年來，Sievers分析儀對來自多家廠商的多個鱟試劑批次進(jìn)行了測試。除了鱟試劑水外，我們還在Eclipse和96孔板讀取器上運(yùn)行了藥品樣品。數(shù)據(jù)顯示，Eclipse的性能與傳統(tǒng)的微孔板讀取器相當(dāng)?？偨Y(jié)即為，Eclipse使用符合藥典的動態(tài)顯色鱟試劑進(jìn)行合規(guī)的細(xì)菌內(nèi)毒素檢測。根據(jù)USP <1225>的驗(yàn)證數(shù)據(jù)表明，Eclipse相當(dāng)于96孔板讀取器。
原文英文版刊登于《American Pharmaceutical Review》2023年5-6月刊，本文有所修改。
參考文獻(xiàn)
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