簡介
細(xì)菌內(nèi)毒素檢測（BET，Bacterial Endotoxins Testing）是測量水樣品、原材料、腸道外藥物中細(xì)菌內(nèi)毒素污染的必要測定程序。全球藥典協(xié)調(diào)統(tǒng)一對細(xì)菌內(nèi)毒素檢測有規(guī)范性專論，概述了3種常用的方法（即凝膠法、動態(tài)濁度法、動態(tài)顯色法）。顯色法分為終點(diǎn)法和動態(tài)法這兩種形式。在此項(xiàng)研究中，我們同時(shí)使用96孔板和Sievers® Eclipse細(xì)菌內(nèi)毒素檢測儀這兩種動態(tài)顯色法平臺，并比較了它們的檢測時(shí)間和結(jié)果。
配備孵育吸光度讀數(shù)器的96孔板是較常用的符合藥典的動態(tài)顯色檢測平臺。傳統(tǒng)的96孔板雖然是周知的可靠的細(xì)菌內(nèi)毒素檢測平臺，卻有諸多無法克服的缺點(diǎn)，比如過長的設(shè)置時(shí)間、重復(fù)的移液步驟、代價(jià)高昂的出錯(cuò)幾率。Sievers® Eclipse是一款符合藥典的微孔板讀數(shù)器，帶有設(shè)計(jì)微流體微孔板，預(yù)載了內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品和陽性對照標(biāo)準(zhǔn)品（PPC，Positive Product Control），在無需采用機(jī)器人技術(shù)的情況下實(shí)現(xiàn)了內(nèi)毒素測定的自動化，并且避免了大部分潛在的操作錯(cuò)誤。
操作程序
*CV：Coefficients of Variation，變異系數(shù)
此項(xiàng)研究由一位合格的分析員來完成，每種方法的10次測定所花的準(zhǔn)備時(shí)間一致。分析員同時(shí)使用完整的96孔板和Eclipse微孔板，每次測定時(shí)共測量21份樣品。在每種方法的10次測定中，5次使用產(chǎn)品，另5次僅使用水樣品。完成此項(xiàng)研究的分析員擁有豐富的移液操作經(jīng)驗(yàn)和10年的鱟試劑測試經(jīng)驗(yàn)。
檢測結(jié)果
表1：Sievers Eclipse平臺和96孔板的檢測時(shí)間比較
表2：Sievers Eclipse平臺和96孔板的10次測定結(jié)果比較
*所有的值均包括常規(guī)水和常規(guī)產(chǎn)品檢測結(jié)果
與96孔板相比，Sievers Eclipse每次測定的平均時(shí)間縮短了27-39分鐘。平均設(shè)置時(shí)間因分析員和所運(yùn)行的具體檢測而異。產(chǎn)品檢測往往需要進(jìn)行多次稀釋，因此分析員需要較長時(shí)間來準(zhǔn)備。但水樣品檢測可以簡化，需要的準(zhǔn)備時(shí)間較短。此項(xiàng)研究結(jié)果表明，假設(shè)分析員每天進(jìn)行2次常規(guī)測定，Sievers Eclipse平臺可使該分析員每年節(jié)省約260小時(shí)或6.5周的工作時(shí)間（假設(shè)分析師一年工作48周，一周工作40小時(shí)）。分析員每年節(jié)省近14%的時(shí)間，可以將省下來的時(shí)間用于實(shí)驗(yàn)室和本部門的其它工作。
此外，現(xiàn)今普遍使用的96孔板要求進(jìn)行繁瑣的移液步驟。假設(shè)分析員檢測21份樣品（即能用96孔板檢測的最多樣品數(shù)），如果使用連續(xù)移液器（Repeater Pipette），則大約需要進(jìn)行242個(gè)移液步驟。如果使用多道移液器（Multi-channel Pipettor）和試劑槽來存放鱟試劑，雖能減少移液步驟，但操作時(shí)間仍然太長，而且技術(shù)上容易出錯(cuò)。在同樣情況下如果用Sievers Eclipse來檢測21份樣品，則僅需進(jìn)行27個(gè)移液步驟，而且設(shè)置時(shí)間和得到結(jié)果的時(shí)間都大大縮短（見下面的圖1和圖2）。
檢測21份樣品時(shí)的效率比較
圖1：Sievers Eclipse和96孔板的連續(xù)移液器操作比較
圖2：Sievers Eclipse和96孔板的多道移液器操作比較
表1和表2中的結(jié)果顯示，Sievers Eclipse可以產(chǎn)生與96孔板相當(dāng)?shù)慕Y(jié)果，但Eclipse的手動操作時(shí)間大大縮短。Eclipse還滿足表3中所列的全部藥典要求。
表3：藥典要求
結(jié)論
Sievers Eclipse是一款合規(guī)的內(nèi)毒素檢測平臺，滿足USP<85>、EP 2.6.14、ChP<1143>、JP 4.01規(guī)定的藥典要求。Sievers Eclipse采用先進(jìn)的工具和技術(shù)（例如Sievers Eclipse微孔板采用先進(jìn)的微流體技術(shù)），使質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室不但大大節(jié)省了分析員的操作時(shí)間，還減少了潛在的無效檢測幾率，以及重新檢測和撰寫調(diào)查報(bào)告所耗費(fèi)的時(shí)間。
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