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技術(shù)文章
細(xì)胞自噬科研實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)介紹
閱讀：164 發(fā)布時間：2024-9-18
應(yīng)用簡介
自噬與多種生理反應(yīng)相關(guān)，比如腫瘤，炎癥，免疫應(yīng)答，氧化應(yīng)激等。通常情況下，對于自噬的研究，除了發(fā)生的機(jī)制本身外，更多的是將自噬與各種生命活動或者疾病結(jié)合起來。比如研究自噬在腫瘤的發(fā)生發(fā)展，炎癥反應(yīng)，氧化應(yīng)激等不同生物學(xué)功能的作用。
技術(shù)原理
自噬是細(xì)胞受到刺激后吞噬自身的細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞器，最終將吞食物在溶酶體內(nèi)降解的過程。自噬體（自噬體）為雙層膜包被的圓形或橢圓形結(jié)構(gòu)，內(nèi)含細(xì)胞質(zhì)，長壽蛋白質(zhì)和異常蛋白聚集物，損傷或多余細(xì)胞器如線粒體，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和微體，病毒和細(xì)菌等。
自噬過程：
1、細(xì)胞接受自噬誘導(dǎo)信號后，在胞漿的某處形成一個小的類似"脂質(zhì)體"樣的膜結(jié)構(gòu)，然后不斷擴(kuò)張，被稱為Phagophore。
2、Phagophore不斷延伸，將胞漿中的任何成分，全部攬入，然后"收口"，成為密閉的球狀的autophagosome，即"自噬體"。
3、自噬體形成后，可與細(xì)胞內(nèi)吞的吞噬泡、吞飲泡和內(nèi)體融合（這種情況不是必然要發(fā)生的）。
4、自噬體與溶酶體融合形成autolysosome，期間自噬體的內(nèi)膜被溶酶體酶降解，2者的內(nèi)容物合為一體，自噬體中的"貨物"也被降解，產(chǎn)物（氨基酸、脂肪酸等）被輸送到胞漿中，供細(xì)胞重新利用，而殘?jiān)虮慌懦黾?xì)胞外或滯留在胞漿中。
實(shí)驗(yàn)方法
一、自噬誘導(dǎo)劑
1、BredeldinA/Thapsigargin/Tunicamycin：模擬內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
2、Carbamazepine/L-690，330/LithiumChloride（氯化鋰）：IMPase抑制劑（即Inositolmonophosphatase，肌醇單磷酸酶）
3、Earle's平衡鹽溶液：制造饑餓
4、N-Acetyl-D-sphingosine（C2-ceramide）：ClassIPI3KPathway抑制劑
5、Rapamycin：mTOR抑制劑
6、XestosponginB/C：IP3R阻滯劑
二、自噬抑制劑
1、3-Methyladenine（3-MA）：（ClassIIIPI3K）hVps34抑制劑
2、BafilomycinA1：質(zhì)子泵抑制劑
3、Hydroxychloroquine（羥氯喹）：Lysosomallumenalkalizer（溶酶體腔堿化劑）
除了選用上述工具藥外，一般還需結(jié)合遺傳學(xué)技術(shù)對自噬相關(guān)基因進(jìn)行干預(yù)：包括反義RNA干擾技術(shù)（Knockdown）、突變株篩選、外源基因?qū)氲取?/div>