流動相被稱為HPLC系統(tǒng)的生命線，它起著至關(guān)重要作用：將樣品輸送通過分離柱，然后輸送至檢測器以鑒定分離出的成分。
流動相通常很少是單一的溶劑，它是水與有機(jī)溶劑相組合制成，比如水與極性溶劑的緩沖液或有機(jī)溶劑按所需比例混合組成。常用的兩種操作模式是：
等度洗脫—在等度模式下，流動相的組成在整個(gè)分析過程中保持不變。即混合物中溶劑的比例是預(yù)先確定的，并且在分析過程中只使用這一種流動相溶劑。
梯度洗脫—通過軟件以預(yù)定模式通過分析運(yùn)行改變組成，運(yùn)行結(jié)束時(shí)溶劑的比例與初始比例不同。
在進(jìn)行色譜分析時(shí)，等度洗脫和梯度洗脫各有優(yōu)勢和劣勢。使用不同溶劑混合物的目的是獲得所需的流動相極性，以實(shí)現(xiàn)樣品的*混溶，并控制樣品組分與固定相的相互作用，以在最短的時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)分離出的組分峰的所需分離度。
為了達(dá)到所需的目標(biāo)，流動相應(yīng)具有以下基本功能：
1、樣品應(yīng)*溶于流動相。任何不溶的情況都會導(dǎo)致流量限制。注入系統(tǒng)之前，務(wù)必檢查樣品在流動相中的溶解度。
2、流動相成分應(yīng)該是無毒無害的。它們不應(yīng)對操作員構(gòu)成健康危害。
3、流動相應(yīng)對樣品成分和固定相呈惰性。任何反應(yīng)都可能導(dǎo)致形成不溶的懸浮液，從而導(dǎo)致液相色譜柱堵塞。高效色譜柱一旦堵塞的話會造成峰寬展，對色譜柱的使用壽命也有影響。
一些肉眼無法看到的化學(xué)物質(zhì)，也可能造成hplc色譜柱的堵塞。因此可以在色譜柱前添加一個(gè)保護(hù)柱，截留導(dǎo)致色譜柱篩板堵塞、柱頭塌陷和柱效下降的化學(xué)物質(zhì)和顆粒物。
恒譜生色譜保護(hù)柱的卡套中內(nèi)含保護(hù)柱芯，柱芯內(nèi)含有硅膠填料。這些色譜填料的存在可以攔截樣品中的一些強(qiáng)保留、強(qiáng)酸性和強(qiáng)堿性物質(zhì)，防止它們對色譜柱內(nèi)填料的污染和損壞。uHPLCs恒譜生保護(hù)柱死體積少，在保護(hù)色譜柱的同時(shí)，對比于其他保護(hù)柱，它能夠大大減少柱外效應(yīng)帶來的譜帶展寬；減少流路擴(kuò)散，提高色譜柱分析靈敏度和分離度；更低的柱芯成本。因此使用液相色譜保護(hù)柱，可以對色譜柱進(jìn)行保護(hù)，是保護(hù)色譜柱很好的方式。
4、與檢測器兼容性好，流動相在通過檢測器時(shí)不應(yīng)給出自己的響應(yīng)。換句話說，檢測器信號應(yīng)僅反映樣品成分的響應(yīng)。但是，這不適用于對包含洗脫化合物的流動相的整體折射率變化做出響應(yīng)的整體性質(zhì)檢測器，例如折射率檢測器。
5、粘度要低。因?yàn)楦哒扯热軇绊懭苜|(zhì)的擴(kuò)散、傳質(zhì)，降低柱效，還會使柱壓降增加，使分離時(shí)間延長。
HPLC技術(shù)在不同領(lǐng)域中具有廣闊的應(yīng)用前景，越來越多的領(lǐng)域應(yīng)用到各種HPLC技術(shù)。色譜操作員應(yīng)該控制好操作條件（包括流動相的一致性）將確保結(jié)果的可重復(fù)性。
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