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原位雜交儀的應(yīng)用有哪些？

閱讀：2549 發(fā)布時(shí)間：2022-10-14
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一、原位雜交儀應(yīng)用
①細(xì)胞特異性mRNA轉(zhuǎn)錄的定位，可用于基因圖譜，基因表達(dá)和基因組進(jìn)化的研究；
②感染組織中病毒DNA/RNA的檢測(cè)和定位，如EB病毒mRNA、人類乳頭狀瘤病毒和巨細(xì)胞病毒DNA的檢測(cè)；
③癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)及其變化的檢測(cè)；
④基因在染色體上的定位；
⑤檢測(cè)染色體的變化，如染色體數(shù)量異常和染色體易位等；
⑥分裂間期細(xì)胞遺傳學(xué)的研究，如遺傳病的產(chǎn)前診斷和某些遺傳病基因攜帶者的確定，某些腫瘤的診斷和生物學(xué)劑量測(cè)定等。
二、注意事項(xiàng)
1、固定液的選擇及固定時(shí)間石蠟組織建議用10%中性緩沖福爾馬林固定6～48h，其它固定液對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能產(chǎn)生一定的影響。組織離體后應(yīng)盡快固定，建議在標(biāo)本離體后30min內(nèi)固定。如樣本固定不及時(shí)，熒光信號(hào)會(huì)減弱。固定液的體積是組織體積的4～20倍，否則固定不充分，容易出現(xiàn)無(wú)信號(hào)或者信號(hào)很弱的現(xiàn)象。而且，為了保證信號(hào)的準(zhǔn)確性，蠟塊最好在2年內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)，已經(jīng)切好的切片在6周內(nèi)檢測(cè)最佳。
2、組織切片和載玻片的選擇組織切片4～5μm 厚，過(guò)厚或過(guò)薄的切片均會(huì)對(duì)信號(hào)的強(qiáng)弱產(chǎn)生影響，而且切片應(yīng)完整，質(zhì)量良好，否則會(huì)在預(yù)處理時(shí)掉片。載玻片的選擇建議使用防脫載玻片，有條件的實(shí)驗(yàn)室可使用更好的陽(yáng)離子或者陰離子專用載玻片，可有效防止脫片現(xiàn)象的發(fā)生。

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