狠狠色丁香久久综合婷婷亚洲成人福利在线-欧美日韩在线观看免费-国产99久久久久久免费看-国产欧美在线一区二区三区-欧美精品一区二区三区免费观看-国内精品99亚洲免费高清

一、 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑

表格一：實(shí)驗(yàn)儀器

儀器	廠家	型號
細(xì)胞培養(yǎng)箱	Thermo Scientific	HERA cell CO2
激光共聚焦顯微鏡	Leica	TCS SP5

表格二：試劑

試劑	廠家
細(xì)胞培養(yǎng)基	Gibco
PBS (0.1 M, pH 7.4)	自配
4 %多聚甲醛溶液	索來寶
BSA	Sigma
Triton-x-100	生工生物
FITC 標(biāo)記羊抗兔熒光二抗	Santa Cruz
DAPI	碧云天

二、 實(shí)驗(yàn)步驟

制作細(xì)胞爬片,根據(jù)實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行加樣操作；

反應(yīng) 24h 后，棄原有培養(yǎng)液， PBS 洗 1 次；

4％的多聚甲醛 4 度固定 15 分鐘，PBS 洗 2 次，5 分鐘/次；

4. 加入 0.1％的 Triton-x-100，室溫孵育 15 分鐘；

5. PBS 洗 3 次，5 分鐘/次；

6. 10％BSA 封閉 30 分鐘；

加入一抗 50μL（稀釋度為 1：100），4℃過夜孵育；

第二天復(fù)溫 30min，PBS 洗 3 次，5 分鐘/次；

每組分別加入 FITC 標(biāo)記羊抗兔熒光二抗 50μL（稀釋度為 1：500），37℃培養(yǎng) 30 分鐘；

PBS 洗 3 次，每次 5 分鐘；

11. DAPI 染色 5 分鐘；

PBS 洗 3 次，每次 5 分鐘；

在激光共聚焦顯微鏡上觀察（使用 405nm 和 488nm 的激發(fā)光源進(jìn)行熒光檢測）。  

三、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果