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用試劑轉(zhuǎn)染raw 264.7細胞怎樣提高轉(zhuǎn)染效率一直是困擾實驗者的一道難題，特別對于10000左右質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)染更是困難；我們實驗室總結(jié)了用Zeta Life公司Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑貨號AD600025轉(zhuǎn)染raw 264.7細胞一套優(yōu)化方案希望對大家轉(zhuǎn)染raw 264.7細胞提高轉(zhuǎn)染效率有一定的幫助。

下圖是8000bp左右的pEGFP-C1在6孔板用Zeta Life Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染raw 264.7細胞的熒光和細胞明場圖片。

 

 

 

提高轉(zhuǎn)染raw 264.7細胞條件如下

一、質(zhì)粒DNA準(zhǔn)備

1、質(zhì)粒DNA濃度700ng/ul（注意：①溶解于無菌雙蒸水或超純水；②無內(nèi)毒素），我用QIAGEN試劑盒除去的內(nèi)毒素

二、操作流程

1、先將細胞接種到細胞培養(yǎng)板，細胞匯合度在70%左右，再進行轉(zhuǎn)染。

2、復(fù)合物制備：將質(zhì)粒DNA與Zeta Life Advanced Transfection Reagent貨號AD600025轉(zhuǎn)染試劑按照1:1（12ug:12ul）關(guān)系直接混合，用移液器吹吸10-15次混勻，室溫靜止10-15分鐘。

3、將復(fù)合物加入*培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)板，并輕輕混勻，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)（不建議把復(fù)合物加入到無血清的培養(yǎng)基里面，我后期會進一步摸索此條件）。

4、轉(zhuǎn)染24小時后對細胞進行正常換液。

5、質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染48小時后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率

三、注意事項：

1本轉(zhuǎn)染方法不適用在下面轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染如：lipo3000、,FuGENE 6、FuGENE HD、Effectene等；

2細胞培養(yǎng)基：Zeta Life公司 z7181-500胎牛血清，Gibco公司DMEM;

四、美國Zeta Life Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑信息：

產(chǎn)品名稱	貨號	規(guī)格	數(shù)量	報價
Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑	AD600025	0.25ML	1	1590
Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑	AD600050	0.5	1	2390
Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑	AD600075	0.75	1	2890
Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑	AD600150	1.5ML	1	4490
Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑	AD600500	5ML	1	電詢
Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑	AD601000	10ML	1	電詢

五、RAW 264.7細胞簡述：

RAW 264.7小鼠單核巨噬細胞白血病細胞. 此細胞株源自雄性Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤。 sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。此細胞株不分泌可檢測到的病毒顆粒，XC斑點形成試驗陰性。 可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖。 可以抗體依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細胞。