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RAW264.7小鼠單核巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑-AD600025試劑
閱讀：908 發(fā)布時間：2022-1-20簡要描述：
RAW264.7小鼠單核巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑用于哺乳動物細(xì)胞、活體動物轉(zhuǎn)染的 Advanced DNA RNA 第三代多肽小分子轉(zhuǎn)染試劑，此技術(shù)成為新的蛋白功能、免疫細(xì)胞及干細(xì)胞治療、研發(fā)及生產(chǎn)的主要關(guān)鍵技術(shù)之一。
一、產(chǎn)品說明：
1、產(chǎn)品名稱
Advanced DNA RNA Transfection Reagent
2、包裝規(guī)格
貨號：AD600025 、AD600050、AD600075、AD600150
規(guī)格：0.25ml、0.5ml、0.75ml、1.5ml
3、儲存條件
常溫運(yùn)輸，4℃保存，可保存兩年，拒絕反復(fù)凍融。
二、RAW264.7小鼠單核巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染質(zhì)粒8100bp效果圖和轉(zhuǎn)染條件
轉(zhuǎn)染條件
質(zhì)粒DNA大小：8100bp
培養(yǎng)板：6孔板
轉(zhuǎn)染試劑用量：6ul
質(zhì)粒DNA用量：電訊
轉(zhuǎn)染試劑：Zeta Life Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑
轉(zhuǎn)染時間：48小時
血清：Z7010FBS-500澳洲胎牛血清
細(xì)胞凍存：CE70100T無血清細(xì)胞凍存液
三、RAW264.7小鼠單核巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑操作步驟：
材料準(zhǔn)備
RNA 濃度 20 uM /L
質(zhì)粒 DNA 濃度 300 ng-2 ug/ul（注意：①溶解于無菌雙蒸水或超純水；②無內(nèi)毒素 ）
提前 1 天接種細(xì)胞：細(xì)胞匯合度在 60-80%左右，再進(jìn)行轉(zhuǎn)染。
核酸復(fù)合物制備：將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照 1:1 關(guān)系直接混合，用移液器吹吸 10-15 次混勻，室溫靜 止 10-15 分鐘。
在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入核酸復(fù)合物：根據(jù)參考用量在細(xì)胞中加入核酸復(fù)合物，并輕輕混勻；細(xì)胞培養(yǎng)基 里面可以含有血清。
細(xì)胞換液：轉(zhuǎn)染 24 小時后對細(xì)胞進(jìn)行正常換液，懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程中不用換液。
分析結(jié)果：質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染 48-72 小時后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率，48-96 小時檢測 mRNA 或蛋白表達(dá)。若 進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選，則在轉(zhuǎn)染后 24-48 小時左右加入適量的藥物進(jìn)行篩選。siRNA 轉(zhuǎn)染后 9 小時熒光檢測轉(zhuǎn)染效率，48-72 小時檢測 mRNA 或蛋白表達(dá)。