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掃描電鏡透射電鏡樣本制備步驟外包服務(wù)介紹
閱讀：698 發(fā)布時(shí)間：2023-12-5 透射電鏡觀察細(xì)胞樣品實(shí)驗(yàn)檢測(cè)
一、 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑
表格一：實(shí)驗(yàn)儀器
儀器 |
透射電子顯微鏡 |
超薄切片機(jī) |
表格二：試劑
試劑 |
PBS（pH7.4） |
無(wú)水乙醇 |
丙酮 |
1% |
Pon812包埋套裝 |
醋酸雙氧鈾 |
醋酸鉛 |
二、 實(shí)驗(yàn)步驟
1. 醛類(lèi)固定：加入1mL 2.5%戊二醛溶液（PBS 稀釋?zhuān)?/span>4度固定過(guò)夜；
2．清洗：用PBS清洗4次，每次靜置15min；
3．固定：用1%溶液 4度固定2h；
4．清洗：用PBS清洗4次，每次靜置15 min；
5．脫水：用50%、70%、80%、90%乙醇梯度脫水各靜置15min(在70%乙醇中靜置過(guò)夜)，再用100%乙醇脫水2次，每次靜置20min；
6．置換：用丙酮置換2次，每次靜置15min；
7. 浸漬：過(guò)程如下：
A．丙酮：包埋劑=2：1（體積比）的浸漬液中浸漬1h；
B．丙酮：包埋劑=1：2（體積比）的浸漬液中浸漬4h；
C．純包埋劑浸漬2次, 每次24h；
8． 包埋：將樣品放入盛有純包埋劑的包埋板中；
10．聚合：將包埋板置于65℃條件下各聚合48h以上；
11．修塊：將包埋頭修成梯形，且樣品表面積小于0.2mm×0.2mm；
12．超薄切片：切片厚度70nm；
13．染色：醋酸雙氧鈾染色 10min后清洗；
醋酸鉛染色 10min后清洗；
14. 上機(jī)檢測(cè)。
透射電鏡制備注意事項(xiàng)(細(xì)胞)
1、細(xì)胞數(shù)量: > 1*10的6次方;
2、消化細(xì)胞時(shí)要注意不要過(guò)度，及時(shí)用含血清的培養(yǎng)液終止消化;
3、終止消化后，預(yù)冷的PBS (pH 7.4 )洗細(xì)胞1-2次離心(1500rpm, 5min)棄上清(細(xì)胞收集在1.5ml的EP管中) ;
4、加入1mL 2.5%戊二醛溶液(需用PBS配制該溶液)，可用吸管輕輕吹散細(xì)胞，使細(xì)胞懸浮于固定液中;
5、4度固定過(guò)夜后寄出 (寄送時(shí)加冰袋，并用2.5%戊二醛溶液將EP管中剩余空間充滿(mǎn))。
腎臟組織樣本制備步驟：
1、迅速取材；2、PBS漂洗2次，切成小塊（米粒大小）；3、快速放入2.5%戊二醛固定液中，4度固定過(guò)夜；4、固定液將整個(gè)容器里面的空間都充滿(mǎn)，封口膜封口；5、多加冰袋運(yùn)輸。
我司擁有成熟的技術(shù)團(tuán)隊(duì)和科學(xué)的管理規(guī)范，實(shí)驗(yàn)流程均嚴(yán)格按照SOP操作，公司擁有的各類(lèi)的儀器設(shè)備為各類(lèi)服務(wù)的順利開(kāi)展及質(zhì)量提供有力的支撐。公司已經(jīng)建立起多個(gè)實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，包括細(xì)胞培養(yǎng)、克隆構(gòu)建、病毒包裝、組織分析、分子檢測(cè)等。