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A549、HT-29、CAL-27、MDA-MB-231細胞培養(yǎng)技術分享
閱讀：688 發(fā)布時間：2024-2-27影響影子：IF:16.6
發(fā)表期刊:Nature Communications
Doi: 10.1038/s41467-022-28213-y
原文標題：Electron transfer-triggered imaging of EGFR signaling activity。
背景：生物過程中的能量轉(zhuǎn)移是通過電子和質(zhì)子的轉(zhuǎn)移來實現(xiàn)的,在腫瘤發(fā)展進程中，與正常細胞相比，腫瘤細胞實現(xiàn)了極其活躍的電子轉(zhuǎn)移，以支持其增殖、分化和遷移。如果能夠通過監(jiān)測與腫瘤增殖相關信號通路的電子轉(zhuǎn)移，則有可能在此基礎上進行治療干預。
方法：研究了用于電子轉(zhuǎn)移觸發(fā)成像的ETTE納米探針在腫瘤治療過程中的動態(tài)監(jiān)測。通過納米探針設計，免疫熒光，western蛋白印跡等方法探究了使用ETTEE納米探針作為顯像劑，在A549肺癌細胞中對EGFR信號通路活性進行成像的效果。通過免疫組化，小鼠活體成像等方法并利用肺癌小鼠模型評估了ETTE納米探針在腫瘤治療過程中對EGFR信號通路活性的動態(tài)監(jiān)測能力。
結(jié)果：我們設計的ETTE納米探針，通過使用二茂鐵-DNA聚合物鏈，在信號通路激活過程中將轉(zhuǎn)移的電子改變?yōu)楣庑盘?，可以在時間和空間尺度上進行活體成像。進一步在A549細胞中使用ETTE納米探針對EGFR信號通路進行成像驗證了EGFR激活水平較高的細胞可以產(chǎn)生更強的信號，即在細胞水平上，EGFR相關信號通路的激活可以通過ETTE納米成像探針實現(xiàn)可視化?；谀[瘤治療過程中EGFR活性下降我們進一步利用ETTE納米探針對腫瘤治療過程進行動態(tài)監(jiān)測，結(jié)果顯示治療組腫瘤部位有更弱的信號。
結(jié)論：綜上所述，我們的研究表明，ETTE納米探針可以在腫瘤治療過程中實現(xiàn)對EGFR信號通路活性的動態(tài)監(jiān)測，并有望在后續(xù)的治療決策和預后中發(fā)揮關鍵作用。
文章引用：
Cell Culture
A549 cells: A549 cells derived from two different sources, American Type Culture Collection (ATCC) and China Center for Type Culture Collection (CCTCC). The A549 cells were maintained in DMEM high glucose (Gibco™, USA) with 10% fetal bovine serum (Zeta life, USA) and 1% penicillin/streptomycin (New Cell & Molecular Biotech, Co., Ltd).
HT-29 cells: HT-29 cells were derived from CCTCC. The HT-29 cells were maintained in DMEM high glucose (Gibco™, USA) with 10% fetal bovine serum (Zeta life, USA) and 1% penicillin/streptomycin (New Cell & Molecular Biotech, Co., Ltd).
CAL-27 cells: CAL-27 cells were derived from CCTCC. The CAL-27 cells were maintained in DMEM high glucose (Gibco™, USA) with 10% fetal bovine serum (Zeta life, USA) and 1% penicillin/streptomycin (New Cell & Molecular Biotech, Co., Ltd).
MDA-MB-231 cells: MDA-MB-231 cells were derived from CCTCC. The MDA-MB-231 cells were maintained in DMEM high glucose (Gibco™, USA) with 10% fetal bovine serum (Zeta life, USA).
文章培養(yǎng)細胞方法總結(jié)
A549、HT-29、CAL-27、MDA-MB-231細胞均使用ZETA life含有10%血清及1%青/鏈霉素的高糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)，MDA-MB-231細胞使用含有10%血清的高糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)。上述細胞正常培養(yǎng)后，提取細胞蛋白，通過Western blot檢測EGFR表達水平。同時，培養(yǎng)的A549細胞移植到小鼠體內(nèi)，并通過活體成像實時觀察腫瘤生長情況。結(jié)果表明，使用ZETA life胎牛血清培養(yǎng)的A549細胞移植后，能夠形成穩(wěn)定的小鼠腫瘤模型。（備注：A549：人非小細胞肺癌細胞；HT-29 ：人結(jié)腸癌細胞；CAL-27：人舌鱗癌細胞；MDA-MB-231：人乳腺癌細胞。）
引用產(chǎn)品
胎牛血清fetal bovine serum (Zeta life, USA) ；
熱門產(chǎn)品
Z7010FBS-500,胎牛血清（澳洲血源）；Z7181FBS-500,胎牛血清（烏拉圭血源）；Z7186FBS-500,胎牛血清（法國血源）；Z7185FBS-500,胎牛血清（巴西血源）；Z7187FBS-500,胎牛血清（墨西哥血源）；Z7180FBS-500,胎牛血清（超低內(nèi)毒素血清）；AD600150，Advanced DNA RNA 細胞轉(zhuǎn)染試劑；AV500150，小動物活體轉(zhuǎn)染試劑Advanced DNA RNA；CE80100T，無血清細胞凍存液 Plus ZT10002-5ml，支原體去除試劑(MRA)
ZETA life FBS（胎牛血清）簡介：
美國ZETA life公司成立于1989年，是國際無血清細胞培養(yǎng)基DMEM/F12主要完成人，有幾十年的胎牛血清、無血清細胞培養(yǎng)基、以及干細胞、免疫細胞及腫瘤細胞等多種不同類型哺乳動物細胞的無血清培養(yǎng)液生產(chǎn)經(jīng)驗；ZETA life也是目前世界胎牛血清、無血清培養(yǎng)基最大的OEM供應商之一；每批血清均有完整的血源證明文件、獸醫(yī)師檢驗證明及品質(zhì)測試報告；ZETA life胎牛血清在100級的無菌間采用全自動方式制造生產(chǎn)，具有良好的可再現(xiàn)性及可追溯性。