化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
植物樣本不再使用液氮可使用NuSmart®核酸直接釋放試劑盒
閱讀：311 發(fā)布時間：2024-8-12植物樣本不再使用液氮可使用NuSmart®核酸直接釋放試劑盒
植物樣本的傳統(tǒng)提取DNA或RNA之前都需要對樣本進行液氮研磨破壞細胞壁，這樣做的好處有以下幾點：
1、植物細胞具有堅固的細胞壁，特別是纖維素和木質(zhì)素等成分，使用液氮研磨可以有效地破壞這些細胞結(jié)構(gòu)，使得細胞內(nèi)DNA/RNA更容易釋放；
2、低溫環(huán)境有助于減少核酸酶的活性，提高核酸的提取質(zhì)量和產(chǎn)量；
3、使樣本均勻破碎，增加提取試劑與核酸的接觸面積，提高核酸提取的效率；
4、對于長片段研究時，更能保持完整性；
看來液氮研磨是bi不可少的步驟，但是一旦樣本量成百上千，液氮研磨就成為繁瑣的限速步驟，而且液氮的溫度低至-196℃，使用過程中極易誤傷，對實驗室人員安全意識要求很高。總結(jié)發(fā)現(xiàn)使用液氮有以下幾個缺點：
1、溫度極低，使用過程中需要佩戴手套和護目鏡；
2、起始樣本量大一些，避免研磨過程中損失；
3、無法高通量操作；
4、無法自動化操作；
5、操作需謹慎，導致提取DNA時間延長數(shù)倍；
那怎么辦呢？NuSmart®核酸直接釋放試劑盒來助力，試劑盒中PL-DNA Lysis和葉片混合后，55℃反應(yīng)5分鐘，DNA模板就制備好了，操作流程見下圖。整個操作流程非常簡單，wan全不用擔心液氮使用問題，也不用擔心一天的效率太低，提高整個工作效率。
NuSmart®核酸直接釋放技術(shù)的優(yōu)勢是什么?劃重點來了——
√對于小量和微量樣本十分友好
√操作簡單，無需訓練
√基因組完整性好
√無酶、無有機試劑
√無大型設(shè)備投入
總結(jié)來說，NuSmart®核酸直接釋放試劑盒中不含有任何有毒、易燃、易爆成分，甚至無需佩戴手套即可取用。
樣本量低對于分子生物實驗室科研人員來說一直都是一個痛點，例如☆法醫(yī)鑒定的拭子含量都是微量
☆待分類細菌沒有合適的培養(yǎng)基培養(yǎng)，產(chǎn)量很低
☆流式分選后細胞很少很少
之所以是痛點，主要是因為按照實驗室常用核酸提取方法只有離心柱提取法或者磁珠提取法，這些方法都需要大量樣本支持。例如30mg組織、106個細胞、100mg水稻葉片、1mL血液等等。這些條件成為下游實驗的限速因素。庫思擇開發(fā)的NuSmart®核酸直接釋放試劑盒對微量樣本非常友好，甚至一個細胞不在話下。參考下圖，使用NuSmart®細胞和組織PCR試劑盒Plus對一個細胞進行處理后，可以有效擴增長達4kb的基因。
使用NuSmart®細胞和組織PCR試劑盒Plus（貨號Nu-C01）處理1個Sp2/0細胞，使用2×Master TaqMix(With Dye)擴增不同長度基因（分別0.5kb、1kb、2kb、3kb、4kb）。
總結(jié)來說無論樣本多少，只要有完整結(jié)構(gòu)、有核酸NuSmart®試劑盒都能夠解決。
目前可以使用的樣本參考如下：
來源 | 范圍 |
細胞 | 293T、A549、Vero、PK15、Sp2/0、HCT-116、Marc145、ST、siHa、MCF-7 |
人 | 頭發(fā)、唾液、咽拭子、全血、精液、腫瘤切片 |
小鼠 | 心、肝、脾、肺、腎、腦、脊柱、胃、大腸、小腸、膽囊、尾巴、腳趾、皮、耳朵、肌肉、EDAT 抗凝血、肝素鈉抗凝血、枸櫞酸鈉抗凝血 |
豬/雞/羊 | 心、肝、脾、肺、腎、淋巴結(jié)、精液、全血、血清 |
亞洲鯽魚 | 魚鰭、魚泡、魚鱗、魚籽 |
病毒 | ASFV、PRV、PPV、PCV |
細菌 | 金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、農(nóng)桿菌、結(jié)核桿菌、糞腸球菌、鏈球菌 |
真菌 | 酵母菌、曲霉菌、犬小孢子菌、口蘑、平菇、白木耳 |
植物
| 煙草、擬南芥、油菜、水稻、大豆、玉米、小麥、棉花、百脈根、西紅柿、土豆、茄子、胡蘿卜、龍眼、荔枝、蘋果、香蕉、葡萄 |
中草藥 | 鐵皮石斛、丹參、益母草、紅花、紫草、苦參、艾葉、靈芝、麥冬、金銀花、淫羊藿、茯苓、蒼術(shù)、白術(shù)、百合、半夏 |
其他微生物 | 支原體、衣原體、螨蟲、跳蟲 |