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豆芽中4種植物生長素的UPLC/MS/MS測定（QuEChERS）
豆芽中 4 種植物生長素的 UPLC/MS/MS 測定（QuEChERS）
《BJS 201703 豆芽中植物生長激素的測定》
一、樣品提取
準(zhǔn)確稱取 10.0 g 經(jīng)粉碎的豆芽置于50 mL離心管中，加入20 mL 含 1% 甲酸乙腈溶液，2500 rpm 渦旋混勻 5 min；然后加入 QuEChERS 萃取鹽包(貨號：Q050025 )，立即手動振搖 30s，渦旋 2min；再以 5000r/min 離心5min，使乙腈和水分層，上層乙腈層待凈化。
二、樣品凈化
精密量取上層乙腈層5 mL置于 QuEChERS凈化管(貨號：Q015014 )15 mL凈化管中，2500 rpm 渦旋混勻 2min，以 5000 r/min 離心5 min，移取上層清液4 mL于另一 15 mL 離心管中，45℃水浴氮吹至干，用甲醇定容至 1mL，過 0.22 µm 尼龍濾膜供上機(jī)測試。
三、標(biāo)曲配制
稱取空白豆芽樣品 10.0 g 按照上述一、二步驟操作，作為空白基質(zhì)提取液；分別精密量取一定量的混合標(biāo)準(zhǔn)液加入到空白基質(zhì)提取液中，用甲醇定容至 1 mL，配制成適當(dāng)濃度的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。
四、儀器條件
色譜條件
儀器：UPLC-MS/MS（Thermo Fisher TQS Endura）
色譜柱：OSD色譜柱 (2.1 mm×50 mm, 1.8 µm)
流動相：A：5 mmol/L 乙酸銨
B：甲醇（0.1% 甲酸）
洗脫方式：梯度洗脫，見表 1
表 1 梯度洗脫程序
時間 /min | A/% | B/% |
0 | 95 | 5 |
2.0 | 70 | 30 |
3.5 | 10 | 90 |
4.0 | 10 | 90 |
4.1 | 95 | 5 |
5.0 | 95 | 5 |
流速：0.3 mL/min 柱溫：35℃ 進(jìn)樣量：5 µL
質(zhì)譜條件
離子源：HESI 電噴霧電壓：3500 V
鞘氣壓力：35 arb 輔氣壓力：3 arb
離子傳輸管：380℃ 輔氣溫度：420℃
表 2 組分名稱、保留時間及特征離子一覽表（* 為定量離子）
名稱 | 保留時間 /min | 母離子 | 子離子 |
赤霉素 | 3.22 | 344.9 | 133.0*，106.0 |
6- 芐基腺嘌呤 | 3.97 | 224.2 | 142.5*，238.9 |
4- 氯苯氧乙酸 | 3.45 | 184.8 | 161.0*，125.1 |
2,4- 二氯苯氧乙酸 | 3.86 | 218.9 | 126.7*，110.7 |
五、實驗結(jié)果
表 3 豆芽中 4 種植物生長激素加標(biāo)回收結(jié)果（25.0 µg/kg）
目標(biāo)物 | 回收率（%） | 平均回收率（%） | RSD（%） | |||
1 | 2 | 3 | 4 | |||
赤霉素 | 96.96 | 88.74 | 96.19 | 91.44 | 93.3 | 4.2 |
6- 芐基腺嘌呤 | 83.47 | 86.42 | 90.84 | 83.81 | 86.1 | 3.9 |
4- 氯苯氧乙酸 | 93.66 | 87.35 | 89.32 | 86.91 | 89.3 | 3.4 |
2,4- 二氯苯氧乙酸 | 78.48 | 77.82 | 78.50 | 75.41 | 77.6 | 1.9 |
豆芽中植物生長激素檢測色譜圖如下：
從上至下出峰順序依次為：4- 氯苯氧乙酸、2,4- 二氯苯氧乙酸、6- 芐基腺嘌呤、赤霉素。注意事項：
1. 該實驗采用 UPLC/MS/MS 檢測，對部分目標(biāo)物有基質(zhì)抑制效應(yīng)，如 6- 芐基腺嘌呤，建議配制基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行定量，校正回收率。
2. 在標(biāo)準(zhǔn)《BJS 201703》中，只取 4 mL 提取液進(jìn)行凈化，離心后取全部凈化液氮吹復(fù)溶，但在實際操作中，離心后實際氮吹復(fù)溶的凈化液體積不到 4 mL，會造成檢測結(jié)果偏低，建議取 5 mL 提取液凈化，再精密量取 4 mL 凈化液氮吹復(fù)溶
訂購信息
貨號 | 描述 | 包裝 |
Q050025 | 4g MgSO4+1g無水醋酸鈉，50 mL 離心管 | 50 支/盒 |
Q015014 | 300mg MgSO4+100 mg C18，15 mL 離心管 | 50 支/盒 |
YQ-CL200 | clover® 多管渦旋混勻儀 | 1 臺/箱 |
CN13N22 | 尼龍 /Φ13 mm/0.22 µm/ 有機(jī)系 | 100 個/盒 |
CN50M45 | MCE/Φ50 mm/0.45 µm/ 水系 | 100 片 /盒 |
CN50N22 | NL 濾膜，直徑 50 mm，孔徑 0.22 µm，水系 | 100 片/盒 |
CL-BC9002 | 2 mL 藍(lán)色聚丙烯蓋，預(yù)開口，9-425 | 100 個/盒 |
CL-SB9004 | 2 mL 螺紋棕色樣品瓶，帶書寫處 11.6*32 mm，9-425 | 100 個/盒 |