當(dāng)前免疫學(xué)研究多采用免疫健全的小鼠模型，小鼠原代免疫細(xì)胞已成為關(guān)鍵工具。 然而，小鼠原代免疫細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)染一直面臨低效率、高死亡率等技術(shù)難題。 現(xiàn)有的轉(zhuǎn)染方法 （如慢病毒、電轉(zhuǎn)、脂質(zhì)體等） 在這些細(xì)胞中效果不佳，特別是在基因編輯等涉及大片段基因遞送的研究中，這一瓶頸尤為明顯。
為突破這一技術(shù)難關(guān)，西湖凝聚體與西湖大學(xué)的研究團(tuán)隊(duì)聯(lián)合開(kāi)發(fā)了ProteanFect CRISPRMax 小鼠免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒。該創(chuàng)新系統(tǒng)采用全新核酸遞送策略，成功解決了傳統(tǒng)方法的局限，能夠 高效遞送大片段核酸，實(shí)現(xiàn)小鼠原代免疫細(xì)胞的高效基因編輯。
在小鼠原代 T 細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)高達(dá) 97% 的基因編輯效率
圖1. ProteanFect CRISPRMax實(shí)現(xiàn)在小鼠原代T細(xì)胞的高效基因編輯
上述結(jié)果來(lái)源于陸·軍軍醫(yī)大學(xué)的研究者，研究中使用了 ProteanFect CRISPRMax 小鼠免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒 （PT06） 。在該實(shí)驗(yàn)中，小鼠原代 T 細(xì)胞共轉(zhuǎn)染了 Cas9 mRNA、目的基因 sgRNA 和 EGFP-mRNA （其中EGFP mRNA用于目標(biāo)細(xì)胞的篩選） ，成功實(shí)現(xiàn)了以下效果：
1、高轉(zhuǎn)染效率：在總細(xì)胞中， 79.5% 的細(xì)胞實(shí)現(xiàn)目的基因敲除 ；而在 EGFP 陽(yáng)性 T 細(xì)胞中， 97% 的細(xì)胞實(shí)現(xiàn)目的基因敲除 ，基因敲除效·果顯·著。
2、高效共轉(zhuǎn)：可利用篩選標(biāo)簽 （如EGFP、Puro等） 方便地富集成功基因編輯的細(xì)胞。
3、低細(xì)胞毒性：實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染后的小鼠T細(xì)胞生存率高，且生理功能未受影響。
ProteanFect 何以如此高效？
ProteanFect 創(chuàng)新基因遞送方式
ProteanFect CRISPRMax 采用了一種創(chuàng)新的生物分子凝聚體技術(shù)：ProteanFect 通過(guò)將蛋白分子和核酸自組裝成一種規(guī)則的納米顆粒，這些納米顆粒能夠通過(guò)細(xì)胞的主動(dòng)內(nèi)吞機(jī)制進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部。這些顆粒穩(wěn)定而功能強(qiáng)大，可以保護(hù) mRNA 免于降解并保持其活性。此外，這種設(shè)計(jì)無(wú)需額外的化學(xué)修飾，從而減少了細(xì)胞毒性，顯著提升實(shí)驗(yàn)的安全性。
ProteanFect CRISPRMax Cas9 基因編輯原理
1、通過(guò)共轉(zhuǎn)染 Cas9 mRNA 與 sgRNA，成功表達(dá) Cas9 蛋白。
2、Cas9 蛋白與 sgRNA 在細(xì)胞內(nèi)自組裝形成 RNP 復(fù)合物。
3、RNP 復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞核并實(shí)現(xiàn)高效基因編輯。
圖3. ProteanFect核酸遞送原理示意圖
ProteanFect與傳統(tǒng)技術(shù)的對(duì)比
ProteanFect 無(wú)需使用病毒載體或電轉(zhuǎn)技術(shù)，避免了病毒可能帶來(lái)的免疫反應(yīng)和安全風(fēng)險(xiǎn)，也避免了電轉(zhuǎn)對(duì)細(xì)胞的損傷。ProteanFect 與其他常用轉(zhuǎn)染方法的對(duì)比 ：
ProteanFect CRISPRMax Cas9 基因編輯卓·越優(yōu)勢(shì)：
高效性能——轉(zhuǎn)染效率可達(dá) 70%-95% ，可同時(shí)遞送多種核酸，共表達(dá)率超 90% ， 適用于人源和小鼠原代免疫細(xì)胞 ；
卓·越安全性—— 非病毒、非電轉(zhuǎn)、非脂質(zhì)體設(shè)計(jì)，基于內(nèi)源蛋白，生物相容性極·佳，顯著降低細(xì)胞損傷；
操作便捷—— 標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)流程，無(wú)需復(fù)雜的預(yù)處理步驟，可重復(fù)性高；
系統(tǒng)靈活——不受細(xì)胞數(shù)量限制，從 103 – 108 個(gè)細(xì)胞都可以轉(zhuǎn)染。
圖4. 使用ProteanFect CRISPRMax Cas9試劑盒在人原代T細(xì)胞和小鼠原代T細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)高效基因標(biāo)記，基因編輯效率范圍為 67%-88% 。
ProteanFect 的廣泛應(yīng)用
ProteanFect 不僅在小鼠原代T細(xì)胞中表現(xiàn)卓·越，還能應(yīng)用于以下領(lǐng)域：
小鼠原代免疫細(xì)胞的基因編輯（NK細(xì)胞、γδ T 等免疫細(xì)胞），以及人源化小鼠免疫細(xì)胞
人原代免疫細(xì)胞基因編輯
疾病模型構(gòu)建
高通量的靶點(diǎn)篩選
圖5. 用戶對(duì)于ProteanFect的認(rèn)可
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