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概述

康寧基質(zhì)基質(zhì)是一種富含細(xì)胞外基質(zhì)®蛋白的水凝膠。®它提取自 Engelbreth-Holm-Swarm （EHS） 小鼠肉瘤，其由層粘連蛋白、IV 膠原、硫酸乙酰肝素蛋白聚糖、內(nèi)肌動(dòng)蛋白/尼多原、TGF-?、表皮生長(zhǎng)因子、胰島素樣生長(zhǎng)因子、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、組織纖溶酶原激活劑和其他生長(zhǎng)因子組成。該協(xié)議將引導(dǎo)您完成使用康寧基質(zhì)膠進(jìn)行3D生物打印的分步過程。

這種水凝膠已成功用于多種 3D 培養(yǎng)和組織工程應(yīng)用。現(xiàn)在，它還可以在  平臺(tái)上用于 3D 生物打印具有多種細(xì)胞系的癌癥球體。將 Matrigel 基質(zhì)與 3D 生物打印機(jī)相結(jié)合，可以以標(biāo)準(zhǔn)化和可重復(fù)的方式實(shí)現(xiàn)球狀體和類器官的自動(dòng)化生成。

儲(chǔ)存和處理

康寧基質(zhì)基質(zhì)應(yīng)儲(chǔ)存在 -20°C 下。該協(xié)議已針對(duì)#354234高濃度基質(zhì)膠進(jìn)行了優(yōu)化。其他 Matrigel 變體可能需要更新打印參數(shù)。

材料

1. 康寧 Matrigel 基底膜基質(zhì) （HC， #354234）， 10 mL 樣品瓶

2. 1 x 15 mL Falcon® 離心管

3. 1 x  5 mL 注射器

4. 1 x 注射器蓋

5. 1 x 全金屬 250 μm 噴嘴

6. 1 x Costar® 多孔板或 Falcon® 培養(yǎng)皿

7. 冰桶

8. 細(xì)胞

9. 細(xì)胞培養(yǎng)基

10. 孵化器

方法

1. 從-20°C中取出康寧基質(zhì)基質(zhì)，并在4°C的冰桶中解凍過夜;

2. 在 15 mL Falcon® 離心管中，制備含有實(shí)驗(yàn)所需適當(dāng)細(xì)胞數(shù)的細(xì)胞沉淀;

• 注：我們建議使用 2 萬/mL 細(xì)胞濃度，并制備總共 5 mL 的細(xì)胞負(fù)載生物墨水。在這種情況下，您需要制備一個(gè)包含 3 萬個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞沉淀。

3. 將CORE™打印頭冷卻至4°C;

4. 將 打印床加熱至 37°C，然后插入您選擇的培養(yǎng)皿（蓋上蓋子），使其達(dá)到設(shè)定溫度;

5. 使用移液管，向細(xì)胞沉淀中加入 3 mL（或所需體積）的 Matrigel®，并上下充分混合以確保細(xì)胞均勻性;

• 注意： 使用冰桶內(nèi)的管子執(zhí)行此步驟，以防止過早交聯(lián)。

6. 從 5 mL 注射器中取出柱塞，并將注射器蓋放在魯爾鎖上;

7. 將冷藏的康寧Matrigel基質(zhì)細(xì)胞溶液移液到注射器筒中，注射器蓋朝下;

8. 從注射器柱塞上取下黑色橡膠塞，將其放入注射器筒的開口中;

9. 將注射器桶翻轉(zhuǎn)為面朝上，確保橡膠塞不會(huì)因固定到位而脫落;

10. 等待物料流到底部，接觸橡膠塞;

11. 取下注射器蓋;

12. 用柱塞將材料向上推，直到它在魯爾鎖針頭上形成彎月面;

• 注意： 執(zhí)行此步驟時(shí)，請(qǐng)防止柱塞重新連接到塞子上。

13. 如果注射器中有氣泡，請(qǐng)敲擊槍管以確保滯留的空氣流向表面;

14. 將250μm全金屬噴嘴連接到注射器上;

15. 將注射器放入CORE™打印頭中，確保盡量減少M(fèi)atrigel®暴露于室溫，以避免過早交聯(lián);

16. 從下面的“打印設(shè)置"部分插入推薦的打印參數(shù)以打印您的類器官;

1. 注意：要操作液滴分辨率（直徑和體積），請(qǐng)查看 Printing Dots 協(xié)議;

2. 注意：由于表面受熱，Matrigel® 液滴在打印過程中會(huì)部分交聯(lián)，但是，請(qǐng)確保不要讓它們?cè)诒砻嫔贤Ａ舫^ 15 分鐘。15分鐘后，液滴將開始變干，從而導(dǎo)致細(xì)胞活力降低。

17. 將Matrigel基質(zhì)液滴板放入培養(yǎng)箱（37°C，95%相對(duì)濕度，5%CO2） 30 分鐘;

18. 添加適量的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

注意：為了獲得佳打印效果，建議不要進(jìn)一步稀釋基質(zhì)。如果您希望將更大體積的細(xì)胞與 ECM 混合，則提供 Cell-Bioink 混合方案。它包含有關(guān)如何通過用載細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋來混合和制備載細(xì)胞的生物墨水的說明。

注意： 查看我們的檢測(cè)方案，進(jìn)一步分析球狀體功能。

打印設(shè)置