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凝膠成像系統(tǒng)在分離純化過(guò)程中起到一個(gè)重要的角色

閱讀：887 發(fā)布時(shí)間：2022-11-23

　　隨著分子生物學(xué)研究逐步的普及，使得凝膠成像系統(tǒng)在國(guó)內(nèi)的需求不斷增長(zhǎng)。無(wú)論是什么用途，凝膠成像的組件都是相似的，都是由一個(gè)拍攝系統(tǒng)、一個(gè)帶有特殊光源的暗箱與獲取和分析凝膠圖片的軟件組成。

　　總體上來(lái)說(shuō)凝膠成像系統(tǒng)可應(yīng)用于：蛋白質(zhì)、核酸、多肽、氨基酸、多聚氨基酸等其他生物分子的分離純化結(jié)果作定性分析。

　　1、分子量定量

　　對(duì)于一般常用的DNA膠片，利用分子量定量功能，通過(guò)對(duì)膠上DNAMarker條帶的已知分子量注釋?zhuān)詣?dòng)生成擬合曲線(xiàn)，并以它衡量得到未知條帶的分子量。通過(guò)這種方法所得到的結(jié)果較肉眼觀察估計(jì)要準(zhǔn)確很多。

　　2、密度定量

　　一般常用的測(cè)定DNA（脫氧核糖核酸）和RNA（核糖核酸）濃度的方法是紫外吸收法，但它只能測(cè)定樣品中的總核苷酸濃度，而不能區(qū)分各個(gè)長(zhǎng)度片段的濃度。

　　利用凝膠成像系統(tǒng)和軟件，先將DNA膠片上某一已知其DNA含量的標(biāo)準(zhǔn)條帶進(jìn)行密度標(biāo)定以后，可以方便的單擊其他未知條帶，根據(jù)與已知條帶的密度做比較，可以得到未知DNA的含量。此方法也適用于對(duì)PAGE蛋白膠條帶的濃度測(cè)定。

　　3、密度掃描

　　在分子生物學(xué)和生物工程研究中，常用到的是對(duì)蛋白表達(dá)產(chǎn)物占整個(gè)菌體蛋白的百分含量的計(jì)算。傳統(tǒng)的方法是利用專(zhuān)用的密度掃描，但利用生物分析軟件結(jié)合實(shí)驗(yàn)室常規(guī)配備的掃描儀或者直接用白光照射的凝膠成像就能完成此項(xiàng)工作。

　　4、PCR定量

　　PCR定量主要是指，如果PCR實(shí)驗(yàn)擴(kuò)增出來(lái)的條帶不是一條，那么可以利用軟件計(jì)算出各個(gè)條帶占總體條帶的相對(duì)百分?jǐn)?shù)。就此功能而言，與密度掃描類(lèi)似，但實(shí)際在原理上并不相同。

　　PCR定量是對(duì)選定的幾條帶進(jìn)行相對(duì)密度定量并計(jì)算其占總和的百分?jǐn)?shù)，密度掃描時(shí)并對(duì)選擇區(qū)域生成縱向掃描曲線(xiàn)圖并積分。

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