常見用于懸浮培養(yǎng)的細胞培養(yǎng)基配比方案

時間：2022/7/19閱讀：3107

培養(yǎng)基是生物細胞進行體外培養(yǎng)的重要營養(yǎng)基質。動物細胞在生物反應器中進行細胞培養(yǎng)時主要采用懸浮培養(yǎng)方式，用于懸浮培養(yǎng)的培養(yǎng)基主要有以下幾種：

一、平衡鹽溶液：
平衡鹽溶液簡稱BSS,它在細胞培養(yǎng)過程中主要為細胞提供微量的無機鹽，起調節(jié)培養(yǎng)基的PH、維持滲透壓平衡等作用。常用來作為洗滌液或配置稀釋培養(yǎng)基使用。實驗中常用的平衡鹽溶液有NaCl溶液，Hanks，Earle’s平衡鹽，PBS緩沖液等。

一般情況下，配制細胞消化液或者洗滌細胞時會采用Hanks或PBS，因為這兩種溶液中幾乎不含鈣、鎂離子，可以減少細胞的粘附性。在密閉的培養(yǎng)器內進行細胞培養(yǎng)時，多數(shù)則采用Hanks’溶液。

幾種常用的平衡鹽溶液配置方案（g/L）

名稱	無Ca2+Mg2+PBS	含Ca2+Mg2+PBS	Earle’s	Hanks’	D-Hanks’
ＮaCl	8.00	8.00	6.80	8.00	8.00
KCl	0.20	0.20	0.40	0.40	0.40
CaCl2	-	-	0.20	0.14	-
MgCl26H2O	-	0.1	-	-	-
MgSO47H2O	-	-	0.20	0.20	-
Na2HPO4	1.15	1.15	-	0.048	0.048
NaH2PO42H2O	-	-	0.14	-	-
KH2PO4	0.20	0.20	-	0.06	0.06
NaHCO3	-	-	2.20	0.35	0.35
葡萄糖	-	-	1.00	1.00	-
酚紅	-		0.01	0.01	0.01

二、動物體液、動物組織提取液
這類培養(yǎng)基主要包含血清、淋巴液、水解蛋白等。其中血清和水解乳蛋白是實驗中使用較多的培養(yǎng)基添加劑，同時也是細胞培養(yǎng)基中的主要營養(yǎng)成分，常使用的血清主要有胎牛血清和新生牛血清。雖然血清的營養(yǎng)成分較高，但是由于其內部成分較為復雜，容易導致下游產物的分離、純化工序繁瑣。所以市場上逐漸出現(xiàn)合成型培養(yǎng)基，比如MEM、DMEM、PRMI1640等.

三、合成細胞培養(yǎng)基
合成細胞培養(yǎng)基是根據(jù)血液及細胞組成成分的研究，確定營養(yǎng)配比，將細胞生長所需要的微生物、氨基酸、微量元素及平衡鹽溶液等安一定比例配比所研發(fā)出的營養(yǎng)組合型培養(yǎng)基。此類培養(yǎng)基廣泛適用于培養(yǎng)瓶、搖瓶細胞培養(yǎng)器和生物反應器等實驗設備中。常用合成型細胞培養(yǎng)基配方可參考下表：

合成細胞培養(yǎng)基的配比表（mg/L）

成份（mg/L）	BEM	DMEM	DMEM/F12	199	MEM	RPMI1640
四水硝酸鈣	-	-	-	-	-	100
氯化鈣	200	200	116.6	200	200	-
硫酸銅	-	-	0.0013	-	-	-
九水合硝酸鐵	-	0.1	0.05	0.70	-	-
七水合硫酸亞鐵	-	-	0.417	-	-	-
KCL	400	400	311.8	400	400	400
六水合氯化鎂	-	-	28.64	-	-	-
無水硫酸鎂	97.67	97.67	48.84	97.67	97.67	48.84
氯化鈉	6800	6400	6999.5	6800	6800	6000
H2NaO4P	121.7	108.7	54.35	121.74	121.74	-
Na2HPO4	-	-	71.02	-	-	800
七水合硫酸鋅	-	—	0.432	-	-	-
L-鹽酸精氨酸	21	84	147.5	70	126	200
L-胱氨酸鹽酸鹽	15.65	63	31.29	26	31.29	65.15
L-谷氨酰胺	292	584	365	100	292	300
甘氨酸	-	30	18.75	50	-	10
L-鹽酸組氨酸	15	42	31.48	21.88	42	15
L-異亮氨酸	26	105	54.47	40	52	50
L-亮氨酸	26	105	59.05	60	52	50
L-鹽酸賴氨酸	36.47	146	91.25	70	72.5	40
L-甲硫氨酸	7.5	30	17.24	15	15	15
L-苯丙氨酸	16.5	66	35.48	25	32	15
L-絲氨酸	-	42	26.25	25	-	30
L-蘇氨酸	24	95	53.45	30	48	20
L-丙氨酸	-	-	4.45	25	-	-
L-谷氨酸	-	-		75	-	20
L-門冬酰胺	-	-	7.5		-	50
L-門冬氨酸	-		6.65	30	-	20
L-鹽酸半胱氨酸	-	-	17.56	0.11	-	-
L-谷氨酸	-	-	7.35	-	-	-
L-脯氨酸	-	-	17.25	-	-	20
L-羥脯氨酸	-	-		10	-	20
L-色氨酸	4	16	9.02	10	10	5
L-酪氨酸	18	72	38.4	40	36	20
L-纈氨酸	23.5	94	52.85	25	46	20
腺嘌呤硫酸鹽	-	-	-	10	-	-
腺苷酸	-	-	-	0.20	-	-
ADT	-	-	-	1	-	-
膽固醇	-	-	-	0.20	-	-
2-脫氧-D-核糖	-	-	-	0.50	-	-
無水葡萄糖	1000	1000	3151	1000	1000	2000
谷胱甘肽（還原型）	-	-	-	0.05	-	1
鳥嘌呤鹽酸鹽	-	-	-	0.30	-	-
HEPES	-	-	3574.5	-	-	-
次yellow嘌-呤	-	-	2	0.30	-	-
亞油酸	-	-	0.042	-	-	-
硫辛酸	-	-	0.105	-	-	-
苯酚紅	10	15	8.10	20	10	5
D-核糖	-	-	-	0.50	-	-
乙酸鈉	-	-	-	50	-	-
胸腺嘧啶	-	-	-	0.30	-	-
聚山梨酯80	-	-	-	20	-	-
尿嘧啶	-	-	-	0.30	-	-
yellow 嘌-呤	-	-	-	0.30	-	-
V-C	-	-	-	0.05	-	-
V-E	-	-	-	0.01	-	-
1,4-丁二胺酸鹽	-	-	0.081	-	-	-
丙酮酸鈉	-	110	55	-	-	-
D-生物素	1	-	0.0035	0.01	-	0.2
V-D2	-	-	-	0.10	-	-
泛酸鈣	1	4	2.24	0.01	1	0.25
氯化膽堿	1	4	8.98	0.50	1	3
葉酸	1	4	2.65	0.01	1	1
肌醇	2	7.2	12.6	0.05	2	35
V-K3	-	-	-	0.01	-	-
煙酸	-	-	-	0.025	-	-
煙酰胺	1	4	2.02	0.025	1	1
對氨基苯甲酸	-	-	-	0.05	-	1
鹽酸吡哆醛	1	4	2	0.025	1	-
V-B6	-	-	0.031	0.025	-	1
V-B2	0.1	0.4	0.219	0.01	0.1	0.2
V-B1	1	4	2.17	0.01	1	1
胸苷	-	-	0.365	-	-	-
V-B12	-	-	0.68	-	-	0.005
V-A	-	-	-	0.14	-	-
pH（無碳酸氫鈉）	5.60～6.20	3.20～3.80	5.50～6.10	3.90～4.50	5.60～6.20	7.20～7.80
pH（加碳酸氫鈉）	7.40～8.00	7.20～7.80	6.50～7.10	7.00～7.60	7.30～7.90	7.50～8.10
滲透壓（無碳酸氫鈉）	238～263	238～263	265～293	238～263	238～263	225～249
滲透壓（加碳酸氫鈉）	285～315	300～332	284～314	274～302	280～310	265～293

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