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            蘇州阿爾法生物實(shí)驗(yàn)器材有限公司
            中級(jí)會(huì)員 | 第6年

            18934597460

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            蛋白質(zhì)電泳常用試劑配制方法

            時(shí)間:2023/6/13閱讀:4335
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            蛋白質(zhì)電泳常用試劑配制方法如下:

            一、3×SDS-PAGE loading buffer的配制

            3×SDS-PAGE loading buffer10ml
            1M Tris-Hcl (PH 6.8)1.5ml
            SDS0.6g
            BPB(溴酚藍(lán))30mg
            甘油(丙三醇)3ml
            去離子水5.5ml

            1、將除BPB以外的藥品溶解。SDS常溫下很難溶解,可以在37℃水浴溶解。溶解后,再加入BPB,進(jìn)行溶解;

            2、把溶好的buffer分裝到1.5ml的離心管中,1ml/管,常溫放置;

            3、使用前,每管加入30µL巰基乙醇。

            注意事項(xiàng):巰基乙醇為危險(xiǎn)品,加入的過(guò)程在通風(fēng)櫥中完成,并且?guī)Ш檬痔住?/p>

            二、10×PBS的配制

            0.1M PBS(10×PBS)1L
            NaH2PO4.2H2O2.83g
            Nacl85g
            Na2HPO4.12H2O28.98g

            1、用去離子水將以上藥品進(jìn)行溶解;(溶解的非常慢,可能需要過(guò)夜)

            2、調(diào)PH值到7.2,用0.4µm的濾膜過(guò)濾。常溫保存;

            3、工作時(shí)用的是1×PBS。

            三、1.5M Tris-Hcl (PH 8.8) 的配制

            1.5M Tris-Hcl250ml
            Tris45.425g

            1、用200ml去離子水將Tris溶解。

            2、用濃鹽酸調(diào)PH值到8.8。

            3、調(diào)好PH的Tris-Hcl定容到250ml。

            4、0.4µm的濾膜過(guò)濾,常溫保存。

            注意事項(xiàng):Tris的緩沖能力很強(qiáng),調(diào)PH值時(shí),費(fèi)些時(shí)間,但不要調(diào)過(guò)。

            四、1M Tris-Hcl (PH 6.8) 的配制

            1M Tris-Hcl250ml
            Tris30.275g

            1、用200ml去離子水將Tris溶解;

            2、用濃鹽酸調(diào)PH值到6.8;

            3、調(diào)好PH的Tris-Hcl定容到250ml;

            4、0.4µm的濾膜過(guò)濾,常溫保存。

            五、30%丙烯酰胺的配制

            30%丙烯酰胺250ml
            丙烯酰胺72.5 ml
            BIS甲叉丙烯酰胺2.5 ml

            1、把藥品用去離子水溶解后定容到250ml;

            2、用濾紙過(guò)濾,放在棕色瓶子中,4℃保存。

            注意事項(xiàng):兩種藥品有毒性,配制過(guò)程要帶手套和口罩。

            六、10%SDS的配制

            1.1g SDS加入10ml去離子水進(jìn)行溶解;

            2.分裝到1.5ml離心管中,-20℃保存。

            七、10%過(guò)硫酸銨的配制

            1.1g 過(guò)硫酸銨加入10ml去離子水進(jìn)行溶解。

            2.分裝到1.5ml離心管中,-20℃保存。

            八、5×SDS-PAGE電泳緩沖液的配制

            5×SDS-PAGE電泳緩沖液1L
            Tris15.1g
            Glycine(甘氨酸)94g
            SDS5g

            將以上藥品用去離子水溶解后定容到1L,常溫保存。工作時(shí)用的是1×SDS-PAGE電泳緩沖液。

            九、考馬斯亮藍(lán)R-250染色液的配制

            1、往1g考馬斯亮藍(lán)R-250中加入250ml異丙醇,在磁力攪拌器上攪拌六小時(shí)以上;

            2、加入650ml去離子水,磁力攪拌器攪拌過(guò)夜;

            3、再加入100ml冰醋酸進(jìn)行溶解,磁力攪拌器攪拌;

            4、在通風(fēng)櫥內(nèi)用濾紙進(jìn)行過(guò)濾。常溫保存。染色液只能反復(fù)用兩次。

            注意事項(xiàng):在磁力攪拌器上攪拌時(shí),要把容器封口。

            十、脫色液的配制

            脫色液1L
            醋酸(冰乙酸)100ml
            乙醇(無(wú)水乙醇)50ml
            去離子水850ml

            常溫保存。

             蘇州阿爾法實(shí)驗(yàn)器材有限公司14年專注于生物實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備與實(shí)驗(yàn)耗材和生物試劑的專業(yè)供應(yīng)商,迄今為止已服務(wù)1000+客戶。主要經(jīng)營(yíng)的儀器類產(chǎn)品包括恒溫振蕩培養(yǎng)箱 ,二氧化碳搖床,全溫振蕩培養(yǎng)箱,振蕩培養(yǎng)箱,Rainin移液器,培養(yǎng)箱,霉菌培養(yǎng)箱,生物反應(yīng)器,發(fā)酵罐,二氧化碳培養(yǎng)箱,液氮罐,超純水機(jī),天平,離心機(jī)、潔凈工作臺(tái)等。廠商企業(yè)授權(quán)包括知楚儀器、朗基、中科美菱,梅特勒,樂(lè)楓,搏旅、NEST、天根、奧盛等80余家。另外還有細(xì)胞培養(yǎng)試劑、腫瘤細(xì)胞、天根試劑盒、碧云天試劑、阿拉丁試劑、過(guò)氧化氫消毒液、季銨鹽消毒劑、復(fù)方季銨鹽消毒液、殺孢子劑、醇類消毒液、濃縮消毒液、除霉菌消毒液、無(wú)塵布、潔凈抹布、滅菌拖把等廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、醫(yī)院、制藥企業(yè)、醫(yī)藥研發(fā)、疾控防御、檢驗(yàn)檢疫等多種場(chǎng)景。


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