詳細(xì)介紹
需要自備的器材:
1.儀器:分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器(2 µL、20
µL、200 µL、1000 µL)。
2.耗材:熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)水
處理的滅菌離心管、吸頭(10 µL、200 µL、1000 µL)、滅菌雙蒸水。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:貓免疫缺陷病毒PCR檢測試劑盒
英文名稱:Feline Immunodeficiency Virus(FIV)RTPCR
貨號:YS30765-R
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
相對定量分析方法 :
2-ΔΔCt
前提:目標(biāo)序列和內(nèi)參序列的擴(kuò)增效率接近100%且偏差在5%以內(nèi)
1、用內(nèi)參基因的CT值歸一目標(biāo)基因的CT值:
ΔCT(test)= CT(target,test)-CT(ref,test)
ΔCT(calibrator)= CT(target,calibrator)-CT(ref, calibrator)
2、用校準(zhǔn)樣本的ΔCT值歸一試驗(yàn)樣本的ΔCT值:
ΔΔCT= ΔCT(test) - ΔCT(calibrator)
3、計(jì)算表達(dá)水平比率:
2 –ΔΔCT=表達(dá)量的比值
使用方法:
一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA 段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
具有下列特點(diǎn):
1.根據(jù) 指標(biāo)的保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物,與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
2.靈敏度比常規(guī) PCR 高 2-3 個數(shù)量級,可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
3.即開即用,用戶只需要提供樣品模板,操作簡單,定量準(zhǔn)確快速。
4.一管式熒光定量 PCR 檢測,避免后續(xù)污染。
5.本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6.本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
注意事項(xiàng):
1. 建議使用新鮮采取的動物組織,若為長期冷凍組織,應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融,否則會導(dǎo)致模板的降解,影響PCR效率。
2. 試劑Buffer AL若低溫保存,易產(chǎn)生沉淀。在使用前務(wù)必將其在室溫中放置一段時(shí)間,也可在37℃水浴中預(yù)熱10 min,以溶解沉淀,混勻后再使用。
3. 電泳檢測時(shí),切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則,電泳時(shí)會在泳道中出現(xiàn)一大團(tuán)拖尾亮帶,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
4. 建議擴(kuò)增片段長度1 kb以內(nèi),以便擴(kuò)增效率佳。
5. 為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
Rabbit Donkey IgG H&L (Alkaline Phosphatase)原裝、分裝187618-60-6 | Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH
Rabbit Guinea pig IgG H&L (FITC)原裝、分裝180570-71-2 | Fmoc-D-Asn(Trt)-OH
Rabbit Guinea pig IgG H&L (Biotin)原裝、分裝112883-39-3| Fmoc-D-Asp(OtBu)-OH
Rabbit Guinea pig IgG H&L (HRP)原裝、分裝167015-11-4 | Fmoc-D-Cys(Trt)-OH
Rabbit Guinea pig IgG H&L (Alkaline Phosphatase)原裝、分裝200623-62-7 | Fmoc-D-Gln(Trt)-OH
Rabbit Pig IgG H&L (FITC)原裝、分裝104091-08-9 | Fmoc-D-Glu(OtBu)-OH
Rabbit Pig IgG H&L (Texas Red ®)原裝、分裝135610-90-1 | Fmoc-D-His(Trt)-OH
Rabbit Pig IgG H&L (HRP)原裝、分裝114360-54-2 | Fmoc-D-Leu-OH|南京肽業(yè)
Rabbit Pig IgG H&L (Alkaline Phosphatase)原裝、分裝92122-45-7 | Fmoc-D-Lys(Boc)-OH|南京肽業(yè)BARD1 antibody [2059C4a]原裝、分裝尿素酶,脲酶(巨豆)
UAP56 antibody [2060C10a]原裝、分裝尿素酶,脲酶(巨豆)
BTAF1 antibody [BTA3D61]原裝、分裝蛋白酶VIII
BTG1 antibody [2095C1a]原裝、分裝蛋白酶VIII
CBLL1 antibody原裝、分裝曲安奈德
Recombinant Human VEGFE protein原裝、分裝曲安奈德
Nova2 antibody原裝、分裝曲安奈德
ZNF16 antibody原裝、分裝曲安奈德(標(biāo)準(zhǔn)品)
TLX2 antibody原裝、分裝β-NADH;還原性輔酶I二鈉鹽
貓免疫缺陷病毒PCR檢測試劑盒SAM68 antibody原裝、分裝毒胡蘿卜素(>95% (HPLC),BC)
PHIP antibody原裝、分裝2D電泳樣品提取液 I
Chicken Goat IgG H&L原裝、分裝2D電泳樣品提取液 II
C Reactive Protein antibody (Biotin)原裝、分裝2D電泳樣品提取液 III
Ferritin antibody (Biotin)原裝、分裝2D電泳樣品提取液 IV
Ferritin antibody (Biotin)原裝、分裝2D電泳樣品提取液 V
Ferritin antibody原裝、分裝不耐熱型性酶
Rabbit Human IgG4 H&L原裝、分裝代(>93%,BR)
Rabbit Human IgG3 H&L (Biotin)原裝、分裝黃素 T(>75%,BS)