化工儀器網(wǎng)
產(chǎn)品簡介
公司供應的DH5αλpir 感受態(tài)細胞提供售前售后服務，感受態(tài)細胞應保存在 -70℃，不可多次凍融和放置時間過長，以避免降低感受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化效率。
詳細介紹
注意事項：
1. 感受態(tài)細胞應保存在 -70℃，不可多次凍融和放置時間過長，以避免降低感受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化效率。
2. 進行轉(zhuǎn)化操作時，應根據(jù)相應溫度及無菌條件的要求進行。
3 為防止轉(zhuǎn)化實驗不成功，可以保留部分連接反應液，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到低。
| 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| DH5αλpir 感受態(tài)細胞 | 100ul*20/100ul*100 | YSRIBIO9632 |
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，后將組織剪成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗（Abbioscience公司），然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作方法（以下操作均按無菌條件的標準進行）
1 取感受態(tài)細胞置于冰浴中，如需分裝可將剛?cè)诨毎麘乙悍盅b到無菌預冷的離心管中，置于冰浴中。
● 一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100 μl，可以根據(jù)實際情況分裝使用。應注意所用DNA 體積不要超過感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一。
以下實驗以100 μl感受態(tài)細胞為例。
2 向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA（100 μl 的感受態(tài)細胞能夠被1 ng 超螺旋質(zhì)粒DNA 所飽和），輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，在冰浴中靜置30 分鐘。
3 將離心管置于42℃水浴中放置60-90 秒，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中，使細胞冷卻2-3 分鐘，該過程不要搖動離心管。
4 向每個離心管中加入900 μl 無菌的SOC 或LB 培養(yǎng)基（不含抗生素）， 混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)1 小時（160-220 轉(zhuǎn)/分鐘），目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。
5 將離心管內(nèi)容物混勻，吸取100 μl 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細胞加到含相應抗生素的SOB 或LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細胞均勻涂開。將平板置于室溫直至液體被吸收，倒置平板，37℃培養(yǎng)12-16 小時。
● 涂布用量可根據(jù)具體實驗來調(diào)整。如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較多，可取更少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；反之，如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較少，可取200-300 μl 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。如果預計的克隆較少，可通過離心（4,000 rpm, 2分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板）
S100鈣結(jié)合蛋白A9(S100A9)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for S100 Calcium Binding Protein A9 (S100A9) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
干擾素誘導T-細胞α亞族趨化劑(ITαC)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Interferon Inducible T-Cell Alpha Chemoattractant (ITaC) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
SATB同源框蛋白1(SATB1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for SATB Homeobox Protein 1 (SATB1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
乳酸脫氫酶C(LDHC)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Lactate Dehydrogenase C (LDHC) 48T/96T Homo sapiens (Human)
CUB帶狀瘡疹透明區(qū)樣域蛋白1(CUZD1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for CUB And Zona Pellucida Like Domains Protein 1 (CUZD1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
貓眼綜合征染色體區(qū)候選基因1(CECR1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Cat Eye Syndrome Chromosome Region, Candidate 1 (CECR1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
生長停滯特異性蛋白6(GAS6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Growth Arrest Specific Protein 6 (GAS6) 48T/96T Homo sapiens (Human)
信號素3E(SEMA3E)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Semaphorin 3E (SEMA3E) 48T/96T Homo sapiens (Human)
抗凝血酶(AT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Antithrombin (AT) 48T/96T Homo sapiens (Human)
絨毛蛋白1(VIL1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Villin 1 (VIL1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
前列腺干細胞抗原(PSCA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Prostate Stem Cell Antigen (PSCA) 48T/96T Homo sapiens (Human)
前胸腺素α(PTMα)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Prothymosin Alpha (PTMa) 48T/96T Homo sapiens (Human)
Kruppel樣因子1(KLF1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Kruppel Like Factor 1, Erythroid (KLF1) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
鈉/氫交換因子1(NHE1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Sodium/Hydrogen Exchanger 1 (NHE1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
不均一核核糖核蛋白K(HNRPK)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Heterogeneous Nuclear Ribonucleoprotein K (HNRPK) 48T/96T Homo sapiens (Human)
甘油磷酸肌醇錨定高密度脂蛋白結(jié)合蛋白1(GPIHBP1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Glycosylphosphatidylinositol Anchored High Density Lipoprotein Binding Protein 1 (GPIHBP1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
胰島素樣蛋白3(INSL3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Insulin Like Protein 3 (INSL3) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
NEL樣蛋白2(NELL2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for NEL Like Protein 2 (NELL2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
角蛋白14(KRT14)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Keratin 14 (KRT14) 48T/96T Homo sapiens (Human)
谷氨酰胺果糖-6-磷酸轉(zhuǎn)氨酶2(GFPT2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Glutamine Fructose-6-Phosphate Transaminase 2 (GFPT2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
二肽基肽酶6(DPP6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Dipeptidyl Peptidase 6 (DPP6) 48T/96T Homo sapiens (Human)
反式高爾基體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)蛋白2(TGOLN2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Trans Golgi Network Protein 2 (TGOLN2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
內(nèi)凝集蛋白2(ITLN2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Intelectin 2 (ITLN2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
鋅指同源框蛋白1B(ZFHX1B)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Zinc Finger Homeobox Protein 1B (ZFHX1B) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
DnaJ/Hsp40同源物亞家族C成員12(DNAJC12)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for DnaJ/HSP40 Homolog Subfamily C, Member 12 (DNAJC12) 48T/96T Homo sapiens (Human)
殺傷細胞免疫球蛋白樣受體3DL1(KIR3DL1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Killer Cell Immunoglobulin Like Receptor 3DL1 (KIR3DL1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
節(jié)律晝夜蛋白1(PER1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Period Circadian Protein 1 (PER1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
Clock同源物(CLOCK)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Clock Homolog (CLOCK) 48T/96T Homo sapiens (Human)
轉(zhuǎn)膠蛋白(TAGLN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Transgelin (TAGLN) 48T/96T Homo sapiens (Human)
隱花色素1(CRY1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Cryptochrome 1 (CRY1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
配對框基因9(PAX9)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Paired Box Gene 9 (PAX9) 48T/96T Homo sapiens (Human)
過氧化還原酶4(PRDX4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Peroxiredoxin 4 (PRDX4) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
X-射線修復交叉互補蛋白6(XRCC6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for X-Ray Repair Cross Complementing 6 (XRCC6) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
DNA修復蛋白RAD50(RAD50)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for DNA Repair Protein RAD50 (RAD50) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
髓細胞觸發(fā)受體1(IREM1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Immune Receptor Expressed On Myeloid Cells 1 (IREM1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
MG1655 感受態(tài)細胞 100ul*50 克隆感受態(tài)細胞
BW25113 感受態(tài)細胞 100ul*10 克隆感受態(tài)細胞
BW25113 感受態(tài)細胞 100ul*50 克隆感受態(tài)細胞
K12 電擊感受態(tài)細胞 50ul*5 克隆感受態(tài)細胞
K12 電擊感受態(tài)細胞 50ul*20 克隆感受態(tài)細胞
ArcticExpress(DE3)pRARE2 感受態(tài)細胞 100ul*10 克隆感受態(tài)細胞
ArcticExpress(DE3)pRARE2 感受態(tài)細胞 100ul*50 克隆感受態(tài)細胞
BL21 感受態(tài)細胞 100ul*10 表達感受態(tài)細胞
BL21 感受態(tài)細胞 100ul*50 表達感受態(tài)細胞
BL21 電擊感受態(tài)細胞 50ul*10 表達感受態(tài)細胞
BL21 電擊感受態(tài)細胞 50ul*20 表達感受態(tài)細胞
BL21(DE3) 感受態(tài)細胞 100ul*10 表達感受態(tài)細胞
BL21(DE3) 感受態(tài)細胞 100ul*50 表達感受態(tài)細胞
BL21(DE3)pLysS 感受態(tài)細胞 100ul*10 表達感受態(tài)細胞
BL21(DE3)pLysS 感受態(tài)細胞 100ul*50 表達感受態(tài)細胞
BL21(AI) 感受態(tài)細胞 100ul*10 表達感受態(tài)細胞
BL21(AI) 感受態(tài)細胞 100ul*50 表達感受態(tài)細胞
BL21 Star(DE3) 感受態(tài)細胞 100ul*10 表達感受態(tài)細胞
BL21 Star(DE3) 感受態(tài)細胞 100ul*50 表達感受態(tài)細胞
BL21-Star(DE3)pLysS 感受態(tài)細胞 100ul*10 表達感受態(tài)細胞
BL21-Star(DE3)pLysS 感受態(tài)細胞 100ul*50 表達感受態(tài)細胞
BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL 感受態(tài)細胞 100ul*10 表達感受態(tài)細胞
BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL 感受態(tài)細胞 100ul*50 表達感受態(tài)細胞
Rosetta(DE3) 感受態(tài)細胞 100ul*10 表達感受態(tài)細胞
Rosetta(DE3) 感受態(tài)細胞 100ul*50 表達感受態(tài)細胞
Rosetta 2(DE3) 感受態(tài)細胞 100ul*10 表達感受態(tài)細胞
Rosetta 2(DE3) 感受態(tài)細胞 100ul*50 表達感受態(tài)細胞
Rosetta-gami 2(DE3) 感受態(tài)細胞 100ul*10 表達感受態(tài)細胞
Rosetta-gami 2(DE3) 感受態(tài)細胞 100ul*50 表達感受態(tài)細胞
Rosetta-gami B(DE3) 感受態(tài)細胞 100ul*10 表達感受態(tài)細胞
Rosetta-gami B(DE3) 感受態(tài)細胞 100ul*50 表達感受態(tài)細胞
Rosetta-gami(DE3)pLysS 感受態(tài)細胞 100ul*10 表達感受態(tài)細胞
Rosetta-gami(DE3)pLysS 感受態(tài)細胞 100ul*50 表達感受態(tài)細胞
Origami(DE3) 感受態(tài)細胞 100ul*10 表達感受態(tài)細胞
Origami(DE3) 感受態(tài)細胞 100ul*50 表達感受態(tài)細胞
Origami2(DE3) 感受態(tài)細胞 100ul*10 表達感受態(tài)細胞
Origami2(DE3) 感受態(tài)細胞 100ul*50 表達感受態(tài)細胞
OrigamiB(DE3) 感受態(tài)細胞 100ul*10 表達感受態(tài)細胞
DH5αλpir 感受態(tài)細胞OrigamiB(DE3) 感受態(tài)細胞 100ul*50 表達感受態(tài)細胞
OrigamiB(DE3)pLysS 感受態(tài)細胞 100ul*10 表達感受態(tài)細胞
OrigamiB(DE3)pLysS 感受態(tài)細胞 100ul*50 表達感受態(tài)細胞
TB1 感受態(tài)細胞 100ul*10 表達感受態(tài)細胞
TB1 感受態(tài)細胞 100ul*50 表達感受態(tài)細胞
技術(shù)傳授:
凍存培養(yǎng)基
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細胞凍存方案
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用 Countess®自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低 1°C。或者，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。