介紹細胞破碎的幾個機械方法
閱讀:1767 發(fā)布時間:2021-11-28
細胞破碎是指利用外力破壞細胞膜和細胞壁,使細胞內容物包括目的產物成分釋放出來的技術,是分離純化細胞內合成的非分泌型生化物質(產品)的基礎。結合重組DNA技術和組織培養(yǎng)技術上的重大進展,以前認為很難獲得的蛋白質現在可以大規(guī)模生產。
但是由于細菌、酵母、真菌、植物細胞壁的組成成分不同,且同類細胞結成的網狀結構也不同,所以其細胞壁的堅固程度不同。而動物細胞雖沒有細胞壁,但具有細胞膜,也需要一定的細胞破碎方法來破膜,達到提取產物的目的。
介紹細胞破碎的幾個機械方法
1.組織搗碎
將材料配成稀糊狀液,放置于筒內約1/3體積,蓋緊筒蓋,將調速器先撥至最慢處,開動開關后,逐步加速至所需速度。一般用于動物組織、植物肉質種子、柔嫩的葉芽等,轉速可高達10000rpm/M以上。由于旋轉刀片的機械切力很大,制備一些較大分子如核酸則很少使用。
2.勻漿器
先將剪碎的組織置于管中,再套入研桿來回研磨,上下移動,即可將細胞研碎。勻漿器的研缽磨球和玻璃管內壁之間間隙保持在十分之幾毫米距離。制作勻漿器的材料,除玻璃外,還可以用硬質塑料、不銹鋼、人造熒光樹脂等。
此法細胞破碎程度比高速組織搗碎機為高,適用于量少和動物臟器組織。
存在的問題:較易造成堵塞的團狀或絲狀真菌,較小的革蘭氏陽性首以及有些亞細胞器,質地堅硬,易損傷勻漿閥,也不適合用該法處理。
3.研缽
多用于細菌或其他堅硬植物材料,研磨時常加入少量石英砂,玻璃粉或其他研磨劑,以提高研磨效果。
4.細菌磨
是一種改良了的研磨器,比研缽具有更大的研磨面積,而且低部有出口。操作時先把細菌和研磨粉調成糊狀,每次加入一小勺,研磨20-30秒即可將細菌細胞*磨碎。