大腸桿菌表達(dá)外源蛋白，在超聲破碎的時(shí)候，用含有1%triton-X-100的PBS懸浮，然后超聲的效果較好，1%triton-X-100的作用還是很明顯的，對(duì)其他的一些細(xì)菌同樣起作用，比如鏈霉菌。
      細(xì)菌沉淀直接加樣品1buffer，再加5ul的巰基乙醇，混勻，離心，煮沸10min，直接上樣，染色脫色步驟如下:將膠放入適量的染色液微波爐里加熱1min（下次適當(dāng)補(bǔ)點(diǎn)醋酸即可）,將染色液換成大量的水（自來(lái)水即可）在微波爐煮10min就可以。 
      在表達(dá)重組蛋白后超聲波破碎細(xì)胞，采用冰浴，400w，破2s停1s，但是不一會(huì)就產(chǎn)生大量泡沫，影響了破碎功率，pbs和tris緩沖液都是這樣，zui后都是破碎不*，而我的目的蛋白就在這些未破碎的細(xì)胞中。

1.會(huì)產(chǎn)生氣泡是因?yàn)槟愕奶筋^位置沒(méi)放好。探頭一定要接近底部，約1cm（我一般是距底部0.5mm）。功率根據(jù)儀器不同會(huì)有所不同，但你可以觀察液面，有波動(dòng)但不要太劇烈就好。

2.破3S停10S，破個(gè)二三十次看看。

3.變幅桿位置擺放也要注意，聽(tīng)聲音如果不對(duì)的話就要及時(shí)調(diào)整。另外可以從菌濃度方面考慮。在破碎時(shí)試著加大體積,強(qiáng)度不要超過(guò)60%.

4.嘗試超8s停8s,對(duì)有些菌體蛋白來(lái)說(shuō)，你的方法很難散熱，導(dǎo)致蛋白變性產(chǎn)生氣泡，停頓時(shí)間稍長(zhǎng)一些，這種情況多見(jiàn)于包涵體形式的蛋白。

鏈霉菌（放線菌）超聲破碎的，用的方法條件是什么？

前處理一般就是配置成一定濃度的菌懸液。
 
使用超聲破碎時(shí)采用的具體條件是：
（1）取細(xì)菌的24h培養(yǎng)液于5000r／min下離心5min收集菌體．
（2）用pH7．5的Na2HPO-NaH2PO緩沖液洗滌3次，再用該緩沖液將菌體配成1：3的菌懸液．置于40mL大塑料試管內(nèi)．
（3）將大塑料試管置于冰浴中，采用超聲波破碎（功率200W，1／2”探頭，破碎30s，間歇30S）．
（4）破碎液于12000r／min下高速冷凍離心30min，收集細(xì)胞碎片和上清夜．