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CUBIC組織透明化試劑——應用實例更新

時間：2024/1/30閱讀：659

CUBIC Trial Kit是一款用于透明化技術CUBIC（Clear, Unobstructed Brain/Body Imaging Cocktails and Computational analysis）的試劑盒。

該方法由上田泰己教授和洲崎悅生教授等人開發(fā)。

只需將組織浸入試劑盒包含的溶液中，即可對小鼠大腦和全組織、靈長類的全腦和甲殼類的全組織進行透明化處理和折射率調整。

該方法有望應用于病理學研究和單細胞水平中的觀察。

數(shù)據(jù)提供：

國立研究開發(fā)法人理化學研究所上田泰己教授、洲崎悅生教授

◆CUBIC特點

● 操作簡單（只需浸入溶液）

● 可透明化整個器官

● 小鼠全腦透明化只需兩周

可進行透明化的組織

小鼠大腦和全組織，靈長類全腦，魚類、甲殼類、甲蟲等的全組織，骨骼（需進行脫鈣處理）

CUBIC Trial Kit試劑盒組成

1. ScaleCUBIC-1 Solution——250 mL x 1支

2. ScaleCUBIC-2 Solution——250 mL x 1支

3. Mounting Solution-1——40 mL x 1支

4. Mounting Solution-2——40 mL x 1支

透明化處理需準備

▼ 試劑：

1. CUBIC Trial Kit

2. 多聚甲醛（產(chǎn)品編號：160-16061）

3. PBS×1（產(chǎn)品編號：164-25511）

▼ 實驗用具：

1. 5 mL/15 mL/30 mL/50 mL錐形管（配合樣品使用）

2. 搖床

3. 用于觀察CUBIC透明化樣品的熒光顯微鏡※和推薦物鏡※※

※共聚焦顯微鏡、雙光子顯微鏡、光片顯微鏡

※※與折射率 (RI=1.49)相匹配的物鏡。

建議在使用之前咨詢顯微鏡制造商。

◆CUBIC實驗方案事例

透明化實驗方案示例（完整器官）

請注意，組織透明化實驗方案中所用試劑用量、處理時間需根據(jù)樣品尺寸進行調整。此外，建議在灌注固定后，取出并重新固定樣品。

各個步驟中使用的試劑量約為12-15 mL，清洗時建議使用試劑量的5-10倍。

*每2天更換新溶液

**建議以2 : 8、3：7的比例混合 (RI = ～1.49) 試劑盒中的Mouting Solution 1 和 2 使用

圖1．使用Scale CUBIC Solution透明化前后小鼠所有器官的案例

免疫組織染色實驗方案示例

腦組織塊的免疫染色案例，詳細實驗方案請見參考文獻（1）

*每2天更換新溶液

**分別用以下溶液稀釋抗體

一抗：0.1% (v/v) Triton X-100, 0.5% (w/v) bovine serum albumin, 0.01% (w/v) sodium azide in PBS

二抗：0.1% (v/v) Triton X-100, 0.1% (w/v) bovine serum albumin, 0.01% (w/v) sodium azide in PBS

***建議以2 : 8、3：7的比例混合 (RI = ～1.49) 試劑盒中的Mouting Solution 1 和 2 使用。

圖2．使用CUBIC處理的腦組織塊經(jīng)三維免疫染色后單光子顯微鏡成像

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CUBIC組織透明化試劑——應用實例更新

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