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            北京強(qiáng)欣博瑞生物技術(shù)有限公司>>技術(shù)文章>>關(guān)于超速離心機(jī)的離心過程本篇看完你就明白了

            關(guān)于超速離心機(jī)的離心過程本篇看完你就明白了

            閱讀:854        發(fā)布時間:2022-9-27
              一般說,離心機(jī)轉(zhuǎn)速在30 000r/min以上的稱為超速離心機(jī)。離心技術(shù),特別是超速離心技術(shù)是分子生物學(xué)、生物化學(xué)研究和工業(yè)生產(chǎn)中*手段。
             
              用離心方法分離生物大分子和亞細(xì)胞物質(zhì)的基本原理是根據(jù)它們在液體介質(zhì)中或者沉降速度不同而形成不同的區(qū)帶,或者它們的密度不同而停留在液體介質(zhì)中不同的位置而把它們一一分開。
             
              前者是沉降速度法,應(yīng)用該法時液體介質(zhì)的最大密度要小于樣品中最小顆粒的密度,離心時選用高轉(zhuǎn)速和短時間;
             
              后者是沉降平衡法,應(yīng)用該法時液體介質(zhì)的最大密度要大于樣品中最小顆粒的密度,離心時選用較低轉(zhuǎn)速和較長時間。實(shí)際操作有幾種形式:
             
              1、差速離心
             
              這種方法是選擇不同轉(zhuǎn)速的離心,分別分離各個不同組分。例如先用低速沉降大顆粒和上清液,在高速離心上清沉降中等顆粒,最后超速離心上清沉降小顆粒。采用逐級提高離心力分離上情液的方法,把不同大小的顆粒分開。
             
              這種方法比較簡單,方便。分離的組份沉到管底,因此可以迅速濃縮所要的組份,減少體積。但回收率和純度是有矛盾的,要提高回收率,勢必提高轉(zhuǎn)速或延長離心時間,這樣大小相近的顆粒也會沉到管底。因此該法多用于粗提純或初步濃縮樣品。
             
              2、速度區(qū)帶(或速度梯度)離心
             
              本法是將樣品放在一個連續(xù)的密度梯度液體上,通過離心,大顆粒沉降快,小顆粒沉降慢。經(jīng)過一段時間,相同的顆粒就在同一深度
             
              形成一條帶子,因此把各種組份分開來。它適用于分離密度相同、而大小不同的物質(zhì),如不同的蛋白質(zhì)組份密度都差不多,但分子量不一樣,用本法很容易將其分開。但對密度不同、大小類似的物質(zhì)則不易分離。
             
              蔗糖梯度是一種常用的介質(zhì)。用不同濃度的蔗糖溶液(5%-60%)配成梯度,用于梯度離心。再分別進(jìn)行收集處于不同區(qū)帶里的各個組份。
             
              3、沉降平衡離心
             
              這是靜力學(xué)的方法。在離心管中形成一個液體梯度,在離心時各組份以不同的速度下沉,但最終停留在與自己相同的密度中,形成一條狹窄的平衡帶,并保持相對的穩(wěn)定。
             
              為了使樣品所有組份都能達(dá)到它們的平衡位置,需要長時間離心。這種方法適用于分離大小相似但密度不同的物質(zhì),如核酸的分離。
             
              氯化銫梯度是常用于平衡離心的介質(zhì),分辨率很高,可區(qū)別密度相差0.05的組分,但離心時間需十幾到幾十小時,且價格很貴。已有一種商品名叫"Percoll"的聚蔗糖溶液可以代替氯化銫梯度。
             
              該介質(zhì)能迅速形成梯度,使離心時間大大縮短到1-2h而仍有很好的分離效果。并且有配套的標(biāo)記珠(Density marker beads)可以測定樣品的密度。

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