關(guān)于是否應對胎牛血清進行熱滅活處理一直存在爭議。血清滅活起源于20世紀70年代之前，在過去并未有人質(zhì)疑滅活的必要性，滅活一直是默認的常規(guī)操作。然而越來越多的證據(jù)表明，血清熱滅活對細胞并沒有顯著的正面作用。隨著研究者們對血清的理解加深以及胎牛血清生產(chǎn)工藝的不斷進步，如今熱滅活不再是必選項。
什么是滅活
血清熱滅活是指將溶解狀態(tài)的血清置于56℃水浴加熱30min。滅活的主要目的是為了去除血清中的補體成分或者支原體等病原體。
什么是補體
補體是存在于動物血液與組織液中的一組經(jīng)活化后具有酶活性的蛋白質(zhì)，它們可輔助特異性抗體完成免疫溶菌和溶血作用，故稱為補體。激活的補體可介導細胞毒性作用，刺激平滑肌細胞收縮，刺激血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞等。
血清中的補體
胎牛的補體系統(tǒng)的發(fā)育不完整，因此胎牛血清中的補體含量非常低。Triglia和Linscott測定了牛血清中9種補體成分：胎牛血清中凝集素、C1和C6的含量約為成年牛的1-3%，除C3外其余成分的含量約為成年牛的5-50%，C3活性幾乎檢測不到。在補體結(jié)合試驗中，在未稀釋的血清中并未出現(xiàn)溶血現(xiàn)象。
熱滅活對細胞的影響
熱滅活并不會改善細胞的狀態(tài)。加熱血清會導致生長因子、維生素、氨基酸等多種營養(yǎng)物質(zhì)被破壞，反而影響細胞的增殖速度和貼壁能力。有研究表明，熱滅活會損害血清中一些促進細胞附著的成分。除此之外，熱滅活過程中還會產(chǎn)生大量的沉淀，這些沉淀物可能被誤認為是微生物污染，從而給實驗帶來不必要的困擾。
支原體問題
尚恩生物血清產(chǎn)品經(jīng)過萬級GMP標準過濾灌裝線,連續(xù)3道0.1um濾膜過濾。通過細菌、真菌、支原體、噬菌體、病毒等多種病原體檢測，完quan不用擔心污染問題，也不需要用熱滅活的方式進行滅菌。
綜上，對于細胞培養(yǎng)效果而言，血清滅活可能弊大于利。因此大部分細胞培養(yǎng)沒有必要進行血清滅活去除補體。不過在某些特殊情況下，如某些免疫學相關(guān)實驗或平滑肌細胞相關(guān)實驗，可能需要對血清進行滅活處理。在實際應用中，同學們還是要根據(jù)實驗需求來決定是否滅活血清哦~
參考文獻
1. Triglia, R.P., Linscott,W.D. Titers of nine complement components, conglutinin and C3b-inactivator in adult and fetal bovine sera. Mol Immunol 17, 741-748 (1980).
2. Application-specific technical information – Application Notes: Heat inactivation – Are you wasting your time? Reprinted from Art To Science, 15, No. 1
3. Giard, D.J. Routine heat inactivation of serum reduces its capacity to promote cell attachment. In Vitro Cellular & Developmental Biology 23, 691-697 (1987).
5
立即詢價
您提交后，專屬客服將第一時間為您服務