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            PriCells:原代細胞鑒定技術(shù)

            時間:2021-9-6 閱讀:268
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            一、形態(tài)學(xué)鑒定
            1. 在倒置顯微鏡中直接觀察活細胞的形態(tài)學(xué)特征
            2. 細胞染色檢查 :
            a) 將無菌玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,加細胞懸液后培養(yǎng);
            b) 待細胞長滿玻片后取出,用 PBS 清洗,之后放于載玻片上,待其自然干燥;
            c) 用 PBS/甲醇(1:1)固定 15 分鐘;
            d) 棄固定液,加合適的染色液染色;
            e) 染色完畢后用清水洗凈,置于空氣中干燥,
            f) 干燥后,用二甲苯透明,光學(xué)樹脂封片后觀察。


            二、免疫組織細胞化學(xué)鑒定
            1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬
            片;
            2. PBS 清洗標本 3 次,各 1 分鐘;
            3. 4%多聚甲醛固定 15 分鐘;
            4. 置于空氣中干燥;
            5. PBS 清洗標本 3 次,各 2 分鐘;
            6. 0.5%Triton X-100 孵育 1 次 20 分鐘;
            7. PBS 清洗標本 3 次 各 2 分鐘;
            8. 3%H2O2孵育 15 分鐘;
            9. DPBS 清洗標本 3 次 各 2 分鐘;
            10. 封閉血清孵育(5%正常二抗血清 DPBS 液 20 分鐘)
            11. 一抗孵育,4℃ 過夜或 37℃ 60 分鐘;
            12. PBS 清洗標本 3 次 各 5 分鐘;
            13. 二抗工作液孵育(濕盒)37℃ 30 分鐘;
            14. PBS 清洗標本 3 次 各 5 分鐘;
            15. C 液(濕盒) 37℃ 30 分鐘;
            16. PBS 清洗標本 3 次,各 5 分鐘;
            17. 用顯色液進行顯色;
            18. 蒸餾水洗滌 2 次 1 分鐘;
            19. 蘇木素復(fù)染 1 分鐘;
            20. 清水洗滌 30 分鐘;
            21. 光學(xué)樹脂封片后觀察。

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