本期細(xì)胞學(xué)堂為大家整理了A-498細(xì)胞的培養(yǎng)條件與傳代、凍存步驟及常見應(yīng)用，幫助您快速上手開展實(shí)驗(yàn)。
細(xì)胞形態(tài)
A498細(xì)胞貼壁生長，呈上皮樣形態(tài)，細(xì)胞鋪開面積大，單位面積細(xì)胞總數(shù)量少，少量細(xì)胞有觸角；
低密度時(shí)可觀察到單個細(xì)胞清晰的邊緣，密度大于100%時(shí)邊緣不清晰，細(xì)胞與細(xì)胞之間沒有間隙；
A-498細(xì)胞顯微鏡圖
培養(yǎng)方法
A-498細(xì)胞的傳代
01
細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)；
02
棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次；
03
加1mL胰酶（含0.25% EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化2-3min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓、分離并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化；
04
按3-4mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4min，棄去上清液，補(bǔ)加2-3mL培養(yǎng)液后吹勻；
05
收到細(xì)胞后首-次傳代推薦將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新的已添加好新鮮培養(yǎng)基的皿中或者瓶中，傳代后每個T25培養(yǎng)液總體積是5-6mL，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2到1:4的比例進(jìn)行。
注意事項(xiàng)
A-498細(xì)胞鋪開面積大，單位面積細(xì)胞總數(shù)量少，需要合理控制傳代密度，建議細(xì)胞密度80%時(shí)，1:2-1:4傳代，2-3天換液或傳代一次；
A-498細(xì)胞的凍存
有血清程序凍存（需梯度降溫）：
01
配置凍存液，凍存液推薦配比：55%（基礎(chǔ)培養(yǎng)基）+40%(血清)+5%（DMSO）或90%胎牛血清+10%DMSO；
02
制備好的細(xì)胞懸液計(jì)數(shù)，計(jì)算總細(xì)胞量；
03
細(xì)胞離心后盡量吸干凈上清，離心轉(zhuǎn)速1200rpm（250g）3min；
04
加入配置好的凍存液重懸，調(diào)整細(xì)胞濃度為3×106~1×107cells/mL；
05
分裝入凍存管，一個凍存管分裝1~1.5mL；
06
推薦使用程序降溫盒，分裝好的凍存管轉(zhuǎn)入程序降溫盒后直接放入-80℃冰箱過夜；
07
從-80℃冰箱取出凍存管迅速轉(zhuǎn)移到液氮長期保存。
常見應(yīng)用
A498細(xì)胞常作為腎細(xì)胞癌研究的模型：
①
通過轉(zhuǎn)染調(diào)節(jié)特定信號通路，研究其對細(xì)胞增殖、侵襲的影響；
②
研究藥物對腎癌細(xì)胞進(jìn)展的抑制作用，篩選腫瘤藥物；
③
通過A498在動物體內(nèi)造模，模擬腎細(xì)胞癌細(xì)胞在體內(nèi)行為，研究腎細(xì)胞癌生物學(xué)特性等。
●參考文獻(xiàn)●
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