外泌體（exosome）是一種由細胞內(nèi)多泡體(multivesicular body，MVB) 與細胞膜融合后，分泌到細胞外基質(zhì)中的膜性囊泡。在正常的生理過程中發(fā)揮著介導(dǎo)細胞間通訊的重要功能，可用于監(jiān)測臨床狀態(tài)，治療反應(yīng)，疾病進展等，同時由于它們具有遞送生物分子的功能，因此它們還有發(fā)展成臨床藥物遞送載體的潛力。
外泌體產(chǎn)生于所有類型的動植物細胞，并且不同細胞、不同生長狀態(tài)的細胞分泌的外泌體差異性很大，因此，為了得到更高濃度、異質(zhì)性相對較小的外泌體，細胞培養(yǎng)上清是外泌體的最佳來源途徑，細胞培養(yǎng)上清中外泌體濃度低、粒徑小、粒徑分布廣（30-150nm，可能有大囊泡存在），實時定量監(jiān)控外泌體分泌情況是工程化外泌體生產(chǎn)的重點也是難點。
納米庫爾特粒度儀（電阻法RPS）可在單顆粒水平對外泌體進行粒徑濃度分析，可無標(biāo)記直接檢測任何培養(yǎng)基類型的細胞培養(yǎng)上清中的外泌體，精準得到外泌體樣本中的完整、真實的粒徑濃度分布，并且3-5分鐘即可完成檢測，是外泌體培養(yǎng)工藝開發(fā)中的得力助手，可助力篩選最佳的培養(yǎng)基以及培養(yǎng)條件。
01篩選無外源性培養(yǎng)基
傳統(tǒng)的培養(yǎng)基都會用到牛血清以補充細胞所需營養(yǎng)，但血清會或多或少引入外源性的外泌體，從源頭上造成了后續(xù)外泌體樣本的污染。通過其他成分代替牛血清，或者經(jīng)過分離除去外泌體，已經(jīng)有各種類型的無外源性外泌體培養(yǎng)基上市，但都真正做到了沒有污染嗎？針對這種疑問，筆者選取了八種不同的聲稱無外源性外泌體的培養(yǎng)基進行測試。
圖1.外泌體培養(yǎng)基測試
通過測試可見，并非所有的培養(yǎng)基都做到了真正的無外源性外泌體，還需擦亮您的眼睛，借助納米庫爾特粒度儀對其進行嚴格的篩選，挑選合適的培養(yǎng)基。
02培養(yǎng)條件優(yōu)選
在通常的外泌體培養(yǎng)過程中，都是分離富集后再進行測定，若純度過低或含量太少，不符合下游研發(fā)需求，則需要重新進行培養(yǎng)，消耗大量的時間成本;亟需一種準確、可靠和快速的方法實時監(jiān)控細胞培養(yǎng)過程中外泌體的分泌含量，使科研工作事半功倍，納米庫爾特粒度儀十分符合這種應(yīng)用場景，使外泌體的研發(fā)更高效。
圖2.外泌體培養(yǎng)上清實時跟蹤測試
在對某培養(yǎng)條件的細胞上清進行跟蹤測試后發(fā)現(xiàn)，外泌體的濃度在培養(yǎng)第5天時達到峰值，往后濃度有所降低，并且粒徑分布也有所變化。
總結(jié)：
納米庫爾特粒度儀（電阻法RPS）在外泌體生產(chǎn)工藝研發(fā)應(yīng)用中有以下優(yōu)勢：
1.方便快捷，可以做到實時監(jiān)測。
2.與樣本折射率無關(guān)，可應(yīng)對各種成分的培養(yǎng)基。
3.單顆粒檢測，大小囊泡之間無互相影響，可得到真實的粒徑分布數(shù)據(jù)。
4.直接檢測外泌體體積粒徑，粒徑準確度媲美電鏡。
5. 精準的濃度測量，可分析不同粒徑范圍內(nèi)的顆粒濃度。
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