什么是細胞外囊泡
EVs是指從細胞中釋放的納米級囊泡，廣泛存在于血液、尿液、唾液等體液中。這些囊泡富含包含功能蛋白、小分子、核酸和其他代謝物。EVs幾乎存在于所有類型的細胞和體液中，包括血漿、尿液、唾液和母乳。EVs所攜帶的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和miRNA的種類和含量可以直接反映其來源的類型。EVs的研究有助于更好地理解細胞生理學和病理學，在臨床上EV不僅在疾病診斷方面展示出巨大的潛力，還可能成為藥物遞送的新工具。因此，滿足特定實驗需求的高純度EV的分離和表征方法，變得尤為重要。
五種分離方法全面對比
在這項研究中，研究者們對五種常見的EV分離技術進行了詳細的評估，包括：
1.傳統(tǒng)差速超速離心法（UC）：轉(zhuǎn)速在30000 r/min以上的稱為超速離心。在超速離心基礎上采用逐漸提高離心速度的方法分離不同大小的樣本，可以有效分離出高純度的EV，常被認為是納米顆粒提取“金標準"。
五種分離方法的TEM結(jié)果
RPS技術
電阻脈沖感應（RPS）技術是一種新興的納米單顆粒表征技術，也是當前基于電學的顆粒表征方法。通過測量通過微小納米孔的電流變化來評估細胞外囊泡的大小和濃度及zeta電位。這種方法具有準確、快速、簡便和高靈敏度的優(yōu)勢，使其成為評估囊泡分離方法質(zhì)量的理想工具。
五種分離方法的粒徑數(shù)據(jù)對比
五種分離方法的濃度數(shù)據(jù)對比
五種分離方法的zeta電位數(shù)據(jù)對比
分離背后的秘密：效率與純度之爭
通過RPS技術，研究人員詳細分析了各分離方法的粒徑分布、顆粒濃度及純度。結(jié)果表明，雖然使用超濾法、qEV柱層析法和ExoQuick方法可以獲得較高的顆粒濃度，但傳統(tǒng)差速超速離心法在純度上表現(xiàn)最佳。
粒徑分布：UC、UF、exoEasy、qEV分離出的EV粒徑較為一致，約為71 nm左右，而ExoQuick分離的EV粒徑稍大，平均為77 nm。
顆粒濃度：超濾法（UC）展示了最高的顆粒濃度，達到了2.10×1012/mL，而UC法的顆粒濃度相對較低，為7.33×1010/mL。
純度：UC法的EV純度最高，每毫克蛋白中包含的顆粒數(shù)達到了7.88×1011。
五種分離方法的EV純度數(shù)據(jù)對比
如何選擇合適的分離方法？
每種分離方法都有其優(yōu)勢。據(jù)研究結(jié)果顯示，超速離心法雖然操作復雜且時間較長，但當實驗需求更高純度的EVs時，超離法依舊是第一選擇；然而，對于追求高效率和大規(guī)模生產(chǎn)的應用場景，超濾法和qEV柱層析法則提供了更快的分離速度和更高的顆粒濃度。
NanoCoulter顆粒分析平臺工作原理示意圖
了解不同分離方法的優(yōu)缺點，將幫助研究人員更好地進行細胞外囊泡相關的實驗研究和應用開發(fā)。本篇文章通過RPS技術，憑借NanoCoulter的精準性能對五種細胞外囊泡分離方法進行了全面評估，為研究人員選擇適合的分離技術提供了科學依據(jù)。
選擇合適的分離方法應考慮實驗需求的具體要求，包括分離的效率、純度以及操作的便利性。選擇合適的顆粒表征方法亦然，在上述研究中NanoCoulter對于EV的表征體現(xiàn)出以下幾點優(yōu)勢：
優(yōu)勢1：單顆粒檢測，精準無干擾
NanoCoulter憑借其先進的納米級RPS技術，實現(xiàn)了對每一個納米顆粒的精準捕捉與分析。想象一下，在復雜的生物流體中，每一個通過納米孔的微小EVs都逃不過它的“全面體檢"。打破了傳統(tǒng)光學方法中大顆粒信號屏蔽小顆粒從而結(jié)果失真的現(xiàn)象。尤其對于EVs這類多分散生物流體樣本，無論是尺寸、濃度還是zeta電位，每一個數(shù)據(jù)都源自對單個顆粒的直接測量，確保結(jié)果的真實可靠。這種精準度，可以讓細胞囊泡的研究邁上一級新的臺階！
優(yōu)勢2：高精度，多參數(shù)分析
NanoCoulter能夠?qū)Vs進行粒徑、粒徑分布、顆粒濃度和zeta電位的全面分析。準確的粒徑分布分析幫助我們了解EVs樣本真實的大小分布情況，顆粒濃度則反映了EVs的豐度和分離質(zhì)量，而zeta電位則與EVs的穩(wěn)定性及工程化EV的遞藥靶向性密切相關。這些數(shù)據(jù)為我們提供了EVs的全面信息，為納米藥物科學研究和臨床應用提供了堅實的數(shù)據(jù)支持。
優(yōu)勢3：適應復雜樣本
不同于傳統(tǒng)的光學方法是對樣本中顆粒進行整體分析，NanoCoulter在復雜多分散樣品中表現(xiàn)出色。它能夠準確表征低折射率、高離子濃度或低流動性液體中的納米顆粒，確保即使在復雜生物體液中也能獲得可靠的結(jié)果，專業(yè)適合生物醫(yī)藥領域的研究。
優(yōu)勢4：快速便捷的操作流程
NanoCoulter的操作流程簡單快捷，無需復雜的樣品前處理，以及設備的熱機及校準步驟。每一張納米孔芯片在生產(chǎn)時即經(jīng)過了嚴格的定標與驗證，在用戶端無需消耗標準品。這使得研究人員能夠更快地獲得結(jié)果，加速科學發(fā)現(xiàn)的步伐。
優(yōu)勢5：應用廣泛
NanoCoulter的應用領域遠不止于EVs研究。在生物醫(yī)藥、材料科學、環(huán)境監(jiān)測等多個領域，它都展現(xiàn)出了巨大的潛力和價值。憑借其高精度、高穩(wěn)定性和廣泛的應用性，NanoCoulter正逐步成為科研人員手中需要的得力助手。
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