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            深圳市安培生物科技有限公司
            中級(jí)會(huì)員 | 第5年

            19126518388

            血清系列
            細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            支原體清除
            細(xì)胞凍存
            實(shí)驗(yàn)耗材
            分子試劑
            細(xì)胞增殖與凋亡
            Biozellen系列
            培養(yǎng)基
            ELISA試劑盒
            TOYOBO(東洋紡)
            ZYMO RESEARCH
            Greiner(格瑞納)
            IKA(艾卡)
            化學(xué)發(fā)光底物(ECL)
            PROSPEC系列
            Epigentek系列
            微生物檢測
            細(xì)胞生物學(xué)
            Corning康寧
            解離試劑
            細(xì)胞類-實(shí)驗(yàn)耗材
            原代細(xì)胞
            植物檢測系列試劑盒
            SERANA
            BSA
            細(xì)胞系
            生化試劑盒
            環(huán)境檢測系列試劑盒(AKEN)
            類器官培養(yǎng)
            緩沖器和解決方案
            生物三凝膠基質(zhì)
            細(xì)胞因子分子
            生物樣本庫
            蛋白研究系列

            細(xì)胞轉(zhuǎn)染率低,轉(zhuǎn)染試劑要全背鍋嗎?

            時(shí)間:2021/9/24閱讀:1595
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            目前細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)主要分為三大類:化學(xué)法、物理法及生物學(xué)法。但是沒有一種方法是通用并且準(zhǔn)確無誤的,所以只有依據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)要求或者實(shí)驗(yàn)探索選擇理想的方法,才能獲得漂亮的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。當(dāng)然也可以在前輩們發(fā)的文獻(xiàn)中多看看,前車之鑒可以減少很多不必要的花費(fèi)。

            細(xì)胞轉(zhuǎn)染低都是轉(zhuǎn)染試劑的問題嗎?純度不夠確實(shí)會(huì)有這樣的問題,所以選擇轉(zhuǎn)染試劑很重要,其次還需要考慮以下幾點(diǎn)影響:

            1. 其他微生物污染

            您覺得您養(yǎng)的細(xì)胞 ,不,不,不 ,可能您只知道您養(yǎng)的是細(xì)胞,你不知道的是您的細(xì)胞可能背著您養(yǎng)了一群小三,比如支原體,病毒,黑膠蟲等等,特別是支原體它可以更改細(xì)胞的特性,穿透細(xì)胞膜進(jìn)行基因改造,培養(yǎng)幾代可能看不到“它"給細(xì)胞做的整容效果,但是隨著代次的增多,細(xì)胞就慢慢體現(xiàn)出來了,“它"已經(jīng)變得不是從前的那個(gè)“它"了,所以建議在轉(zhuǎn)染之前進(jìn)行一次支原體檢測,如有支原體清除干凈再轉(zhuǎn)染。

            2.交叉污染:

            如果同時(shí)養(yǎng)了很多細(xì)胞,在操作的時(shí)候沒有規(guī)范化,然后不小心讓A細(xì)胞到B細(xì)胞家里走了個(gè)親戚,最后的結(jié)果可能就是A細(xì)胞和B細(xì)胞不離不棄,若B細(xì)胞比較強(qiáng)悍,可能會(huì)發(fā)生鳩占鵲巢的事情。所以操作的時(shí)候一定要注意,發(fā)生不明確的交叉污染,寧可錯(cuò)殺一千,不要放過一個(gè)。

            3.轉(zhuǎn)染高不高,時(shí)機(jī)很重要

            轉(zhuǎn)染細(xì)胞真的沒有那么容易 ,想什么時(shí)候都可以,就像不尿急,占個(gè)廁所也拉不出來,相比非分裂的細(xì)胞—正在分裂的細(xì)胞往往會(huì)比靜止細(xì)胞更容易攝取并表達(dá)外源DNA,因此對(duì)大多數(shù)操作而言,細(xì)胞一般建議在轉(zhuǎn)染當(dāng)天或者前一天種板,需要注意的是,鋪板細(xì)胞不宜過多,特別是瘋長的癌細(xì)胞,因?yàn)槿绻?xì)胞較多,甚至互相疊加,細(xì)胞自己都吃不飽,住不好,它也糟心的很,哪有時(shí)間和您玩轉(zhuǎn)染?

            4. 抗生素和血清帶偏的轉(zhuǎn)染效果

            本來想 ,能讓個(gè)細(xì)胞好好生長不容易 ,為了防治心里覺得細(xì)胞可能產(chǎn)生的各種污染 ,于是給他們加上各種抗生素預(yù)防,比如青霉素和鏈霉素,在細(xì)胞轉(zhuǎn)染的時(shí)候,若含有這兩個(gè)組分,可增加細(xì)胞的通透性,導(dǎo)致轉(zhuǎn)染過低或者細(xì)胞全死亡,所以細(xì)胞它是不會(huì)說話 ,要是會(huì)說話,肯定要罵我們了 ,好好的為啥一直給他們吃各種的藥。有些轉(zhuǎn)染技術(shù)如脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染在有血清存在的情況下效率會(huì)很低,因此轉(zhuǎn)染前要去除血清。

            5. 另外DNA不純,攜親戚上陣或內(nèi)毒素超標(biāo),都會(huì)引起轉(zhuǎn)染效果偏低或者細(xì)胞死亡現(xiàn)象的發(fā)生,還是回到開頭的那句話,選擇合適的試劑,多參考前輩們的意見。


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