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深圳市安培生物科技有限公司

中級(jí)會(huì)員 | 第5年

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產(chǎn)品分類品牌分類

血清系列: SERANA胎牛血清低內(nèi)毒素膠原蛋白 ZETA LIFE胎牛血清

細(xì)胞轉(zhuǎn)染: 活體轉(zhuǎn)染試劑 LIPO3000轉(zhuǎn)染試劑高效轉(zhuǎn)染試劑

支原體清除: 支原體去除試劑

細(xì)胞凍存: 無(wú)血清細(xì)胞凍存液

實(shí)驗(yàn)耗材: 多功能開(kāi)關(guān)器封板膜 PCR & qPCR 孔板 qPCR耗材 PCR耗材

分子試劑: RNA提取等溫?cái)U(kuò)增克隆突變 PCR系列核酸提取純化核酸染料

細(xì)胞增殖與凋亡: 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)

Biozellen系列: 鼠尾膠原蛋白 3D基質(zhì)膠

培養(yǎng)基: 內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基細(xì)胞添加劑無(wú)血清培養(yǎng)基

ELISA試劑盒: 豬ELISA試劑盒小鼠ELISA試劑盒

TOYOBO（東洋紡）: PCR相關(guān)試劑

ZYMO RESEARCH: 試劑盒

Greiner（格瑞納）: 細(xì)胞培養(yǎng)小室

IKA（艾卡）: 刀頭

化學(xué)發(fā)光底物（ECL）: ECL化學(xué)發(fā)光液

PROSPEC系列: 單胺氧化酶

Epigentek系列: 細(xì)胞分析試劑盒

微生物檢測(cè): 生化鑒定試劑盒

細(xì)胞生物學(xué): 細(xì)胞輔助試劑細(xì)胞檢測(cè)試劑

Corning康寧: 凍存管嵌套/小室

解離試劑: 胰蛋白酶

細(xì)胞類-實(shí)驗(yàn)耗材: 細(xì)胞培養(yǎng)瓶細(xì)胞培養(yǎng)皿細(xì)胞培養(yǎng)板

原代細(xì)胞: 小鼠原代細(xì)胞

植物檢測(cè)系列試劑盒: 植物激素系列植物氧化與抗氧化系列植物氮代謝系列植物脂肪酸代謝系列植物固氮作用系列植物呼吸作用系列植物光合作用檢測(cè)試劑盒

SERANA: BSA

細(xì)胞系: 人源細(xì)胞系

生化試劑盒

環(huán)境檢測(cè)系列試劑盒（AKEN）: 土壤氧化還原酶系列

類器官培養(yǎng): 培養(yǎng)試劑盒

緩沖器和解決方案: 抗生素培養(yǎng)添加物隱窩增強(qiáng)劑保護(hù)液洗滌液凍存液解離液

生物三凝膠基質(zhì): 細(xì)胞外基質(zhì)

細(xì)胞因子分子: 抑制劑激動(dòng)劑

生物樣本庫(kù): 類器官

蛋白研究系列: 蛋白緩沖 ALP發(fā)光液 ECL系列轉(zhuǎn)印膜轉(zhuǎn)膜封閉 PAGE凝膠試劑盒蛋白電泳蛋白制備免疫檢測(cè)

修飾檢測(cè)試劑盒: 蛋白修飾檢測(cè)試劑盒

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高效轉(zhuǎn)染質(zhì)粒大小10646bp、HGF-1牙齦成纖維細(xì)胞的操作方法

時(shí)間：2021/11/11閱讀：1978

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高效轉(zhuǎn)染質(zhì)粒大小10646bp、HGF-1牙齦成纖維細(xì)胞的操作方法

轉(zhuǎn)染條件

細(xì)胞密度：60左右

質(zhì)粒DNA濃度：648ng/ul

質(zhì)粒DNA大小：10646bp

培養(yǎng)板：6孔板

轉(zhuǎn)染試劑用量：8ul

質(zhì)粒DNA用量：電訊

轉(zhuǎn)染試劑：AD600150，Zeta Life Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑

轉(zhuǎn)染時(shí)間：48小時(shí)

血清：Z7010FBS-500澳洲胎牛血清

細(xì)胞凍存：CE70100T無(wú)血清細(xì)胞凍存液

細(xì)胞活力檢測(cè)：K009-500，CCK8

操作方法

提前 1 天接種細(xì)胞：細(xì)胞匯合度在 60-80%左右，再進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

核酸復(fù)合物制備：將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照 1:1 關(guān)系直接混合，用移液器吹吸 10-15 次混勻，室溫靜止 10-15 分鐘。

在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入核酸復(fù)合物：根據(jù)參考用量在細(xì)胞中加入核酸復(fù)合物，并輕輕混勻；細(xì)胞培養(yǎng)基里面可以含有血清。

細(xì)胞換液：轉(zhuǎn)染 24 小時(shí)后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行正常換液，懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染過(guò)程中不用換液。

分析結(jié)果：質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染 48-72 小時(shí)后熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率，48-96 小時(shí)檢測(cè) mRNA 或蛋白表達(dá)。若進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選，則在轉(zhuǎn)染后 24-48 小時(shí)左右加入適量的藥物進(jìn)行篩選。siRNA 轉(zhuǎn)染后 9 小時(shí)熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率，48-72 小時(shí)檢測(cè) mRNA 或蛋白表達(dá)。

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