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深圳市安培生物科技有限公司

中級(jí)會(huì)員 | 第5年

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當(dāng)前位置：深圳市安培生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>大鼠肝星狀細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)

產(chǎn)品分類品牌分類

血清系列: SERANA胎牛血清低內(nèi)毒素膠原蛋白 ZETA LIFE胎牛血清

細(xì)胞轉(zhuǎn)染: 活體轉(zhuǎn)染試劑 LIPO3000轉(zhuǎn)染試劑高效轉(zhuǎn)染試劑

支原體清除: 支原體去除試劑

細(xì)胞凍存: 無血清細(xì)胞凍存液

實(shí)驗(yàn)耗材: 多功能開關(guān)器封板膜 PCR & qPCR 孔板 qPCR耗材 PCR耗材

分子試劑: RNA提取等溫?cái)U(kuò)增克隆突變 PCR系列核酸提取純化核酸染料

細(xì)胞增殖與凋亡: 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)

Biozellen系列: 鼠尾膠原蛋白 3D基質(zhì)膠

培養(yǎng)基: 內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基細(xì)胞添加劑無血清培養(yǎng)基

ELISA試劑盒: 豬ELISA試劑盒小鼠ELISA試劑盒

TOYOBO（東洋紡）: PCR相關(guān)試劑

ZYMO RESEARCH: 試劑盒

Greiner（格瑞納）: 細(xì)胞培養(yǎng)小室

IKA（艾卡）: 刀頭

化學(xué)發(fā)光底物（ECL）: ECL化學(xué)發(fā)光液

PROSPEC系列: 單胺氧化酶

Epigentek系列: 細(xì)胞分析試劑盒

微生物檢測(cè): 生化鑒定試劑盒

細(xì)胞生物學(xué): 細(xì)胞輔助試劑細(xì)胞檢測(cè)試劑

Corning康寧: 凍存管嵌套/小室

解離試劑: 胰蛋白酶

細(xì)胞類-實(shí)驗(yàn)耗材: 細(xì)胞培養(yǎng)瓶細(xì)胞培養(yǎng)皿細(xì)胞培養(yǎng)板

原代細(xì)胞: 小鼠原代細(xì)胞

植物檢測(cè)系列試劑盒: 植物激素系列植物氧化與抗氧化系列植物氮代謝系列植物脂肪酸代謝系列植物固氮作用系列植物呼吸作用系列植物光合作用檢測(cè)試劑盒

SERANA: BSA

細(xì)胞系: 人源細(xì)胞系

生化試劑盒

環(huán)境檢測(cè)系列試劑盒（AKEN）: 土壤氧化還原酶系列

類器官培養(yǎng): 培養(yǎng)試劑盒

緩沖器和解決方案: 抗生素培養(yǎng)添加物隱窩增強(qiáng)劑保護(hù)液洗滌液凍存液解離液

生物三凝膠基質(zhì): 細(xì)胞外基質(zhì)

細(xì)胞因子分子: 抑制劑激動(dòng)劑

生物樣本庫: 類器官

蛋白研究系列: 蛋白緩沖 ALP發(fā)光液 ECL系列轉(zhuǎn)印膜轉(zhuǎn)膜封閉 PAGE凝膠試劑盒蛋白電泳蛋白制備免疫檢測(cè)

修飾檢測(cè)試劑盒: 蛋白修飾檢測(cè)試劑盒

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大鼠肝星狀細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)

時(shí)間：2021/12/6閱讀：1236

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材料與儀器

雄性 SD 大鼠
戊巴（匕匕）妥鈉小牛血清 DMEM 酶消化液I、Ⅱ Nycodenz D-Hanks’液 HBSS 臺(tái)盼蘭
手術(shù)器械尼龍網(wǎng) 相差顯微鏡熒光顯微鏡

步驟

一、實(shí)驗(yàn)步驟

1. 大鼠腹腔麻醉后在超凈臺(tái)上剖腹，進(jìn)行門靜脈插管。

2. 以D-Hanks‘液灌注，同時(shí)剪開下腔靜脈，沖掉血液后，改灌以100 ml 酶消化液I(0.05% IV 型膠原酶)。

3. 待肝臟變軟后，離體肝臟并剪碎，繼續(xù)以酶消化液II(含20U/ml DNase I 的0.05% IV 型膠原酶)消化15 min，尼龍網(wǎng)過濾后以450 g 離心5 min(4℃，下同)。

4. 以HBSS 重懸沉淀至10 ml，再混以20 ml Nycodenz 液，分置于離心管中，并分別覆以2-3 ml HBSS，1450 g 離心16 min 后取界面細(xì)胞。

5. 以HBSS重懸后再次離心收集細(xì)胞，以DMEM重懸后進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，并判斷存活率和產(chǎn)量，最后按照常規(guī)方法接種(105 細(xì)胞/cm2 )，次日換液，以后每2-3 天換液一次。

6. 傳代方法：棄去培液后以D-Hanks’液洗兩次，加0.125%胰酶(原代最好加0.05% EDTA)消化，鏡下觀察細(xì)胞突起回縮(2-5 min左右)，以*培液(DMEM+10% NBS)終止反應(yīng)(若不用EDTA，可以不需離心)，充分吹打后以 1:2-1:3 接種，然后繼續(xù)培養(yǎng)(5% CO2，37℃)。

二、結(jié)果

接種次日，光鏡下可見細(xì)胞呈星芒狀，胞質(zhì)內(nèi)有脂滴，熒光鏡下328 nm 處見自發(fā)熒光。附照片(圖 1)。

圖 1. 原代培養(yǎng)第 2 天的大鼠肝星狀細(xì)胞



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