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            深圳市安培生物科技有限公司
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            蛋白研究系列

            標(biāo)簽酶消化釋放標(biāo)簽實驗

            時間:2022/3/24閱讀:1330
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            材料與儀器

            溶液與緩沖液 LoTE
            Eppendorf 試管

            步驟


            實驗方案 A

            1.向含有 Dynabeads 的每個試管中加入下列物質(zhì):

            2.65℃ 下酶解 Ih(每 IOmin 混合 1 次)。

            3.時收集上清液(含有釋放的 cDNA 標(biāo)簽)

            4.用 LoTE 擴容到 200mL。

            5.等體積的 PCI 抽提,乙醇沉淀(實驗方案 A,第 2 步)。

            6.將沖洗和風(fēng)干后的沉淀重新懸浮于 10 ul LoTE 中。

            實驗方案 B

            1.從 PCR 試管中移去連接反應(yīng)混合物并用 50ul 洗液洗滌 1 次。

            2.從試管中移去沖洗液,加入 50 ul 的 1X 限制性緩沖液,然后移去限制性緩沖液。

            3.向試管中加入下列物質(zhì):

            4.在 65°C 下消化 lh。

            5.加入 175ul 的 LoTE 然后轉(zhuǎn)移到 1.5 ml 的 Eppendorf 試管中。不要丟棄,因為混合物中含有所釋放的附著于接頭上的 SAGE 標(biāo)簽。

            6.如上所述,用等體積的 PCI 抽提,乙醇沉淀(實驗方案 A,第 2 步)。

            7.將沖洗和風(fēng)干后的沉淀重新懸浮于 21.5ul 的 LoTE 中。

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