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            深圳市安培生物科技有限公司
                                                                        
            
										  中級(jí)會(huì)員 | 第5年									
            
                                    								
            

							
            
						
            
                        

					
            
										
            
						
            
                            							
            
								
            
								
            
									
            19126518388
            
								
            
							
            
                            						
            
					
            
										
				
            
			
            
			
            
				
            
					
				
            
			
            
		
            

		
		 
				
            
			
            
				
			
            
		
            
		
            
			
            
				
            
					
            
						

						
            
							
            
																														
            
											
            血清系列
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            支原體清除
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            細(xì)胞凍存
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            實(shí)驗(yàn)耗材
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            分子試劑
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            細(xì)胞增殖與凋亡
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            Biozellen系列
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            培養(yǎng)基
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            ELISA試劑盒
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            TOYOBO（東洋紡）
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            ZYMO RESEARCH
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            Greiner（格瑞納）
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            IKA（艾卡）
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            化學(xué)發(fā)光底物（ECL）
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            PROSPEC系列
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            Epigentek系列
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            微生物檢測(cè)
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            細(xì)胞生物學(xué)
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            Corning康寧
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            解離試劑
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            細(xì)胞類-實(shí)驗(yàn)耗材
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            原代細(xì)胞
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            植物檢測(cè)系列試劑盒
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            SERANA
            
											
            
											
            
																						 												BSA
											 																						
            
											
            
																					
            
											
            細(xì)胞系
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            生化試劑盒
            
											
            
											
            
																						
            
											
            
																					
            
											
            環(huán)境檢測(cè)系列試劑盒（AKEN）
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            類器官培養(yǎng)
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            緩沖器和解決方案
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            生物三凝膠基質(zhì)
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            細(xì)胞因子分子
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            生物樣本庫
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            蛋白研究系列
            
											
            
											
											
            
																																						

							
            
                            						    
                            						
            



						



            
					
            
						
            冰凍切片的原位雜交實(shí)驗(yàn)
            
						
            
							時(shí)間：2022/3/24閱讀：1603
							
            
							
				
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            材料與儀器

            冰凍切片
            Tris·Cl EDTA 甘氨酸 PBS SSC 乙醇 甲酰胺 硫酸葡聚糖 DTT NaCl
            加濕盒 水浴鍋 培養(yǎng)箱

            步驟

            1.  從冰箱中取出載玻片，平衡至室溫，再打開玻片盒。置載玻片于架中，浸泡于以50 mmol/l Tris·Cl（pH7.5）/5 mmol/l EDTA所配的鏈霉蛋白酶液中，放10 min。
             
            2.  室溫下將載玻片浸于含2 mg/ml 甘氨酸的PBS中30 s，然后再于PBS中浸2次，毎次30 s。
             
            3.  浸載玻片于新配的TEA緩沖液中5 min。
             
            4.  在一個(gè)燒杯中，配足量TEA緩沖液以沒過載玻片。加乙酸肝至終濃度0.25%，迅速倒在載玻片上，晃動(dòng)玻片架使液體充分混合，放置10 min。

            5.  在2×SSC中洗載玻片2次，每次5 min。
             
            6.  按順序經(jīng)30%、60%、80%、95%和100%乙醇依次縵泡脫水，每次浸2 min，干燥切片并馬上用于雜交。
             
            7.  沉淀標(biāo)記的DNA或RNA探針。確定標(biāo)記摻入的百分率（比活）并估計(jì)合成的探針量，并按最終每千堿基0.2 μg/ml 的濃度，估算雜交混合液的終體積，依此重懸探針沉淀。
             
            8.  首先以2份雜交混合液B及2份去離子的甲酰胺重懸探針沉淀，隨后加1份50%硫酸葡聚糖，充分混合。
             
            9.  標(biāo)記的DNA探針煮沸2 min，馬上置于冰??；或于80℃加熱標(biāo)記的RNA探針30 s，維持于50℃。熱變性后，加3.3 mol/l DTT至50 mmol/l 終濃度。用加樣吸頭，加足量探針充分覆蓋切片。

            10.  玻片放入密封閉良好的加濕盒中溫育4 h，加濕盒中加有加濕盒液B。探針于37 ℃溫育探針于42℃溫育。

            11.  對(duì)DNA探針：以預(yù)熱至37℃的DNA洗液洗2 h，其間換洗液4~5次。

            12.  對(duì)RNA探針：
             
            （1）在預(yù)熱至50℃的RNA洗液1中洗15 min，至少洗2次。
             
            （2）玻片在37℃的含20 μg/ml 經(jīng)煮沸處理RNA酶A的0.5 mol/l NaCl / 10 mmol/l Tris·Cl（pH8.0）液中溫育15 min。

            （3）在預(yù)熱至50℃的RNA洗液1中冼15 min至少洗2次。

            （4）在預(yù)熱至50℃的RNA冼液2中冼15 min，換液2次，（如需要的話，洗片溫度可髙至60℃，不過對(duì)形態(tài)學(xué)結(jié)果可能有影響）。
             
            13.  在以下各溶液中依次浸泡脫水，每次浸泡2 min：含0.6 mol/l NaCl 的30%乙醇、含0.6 mol/l NaCl 的60%乙醇、80%乙醇、95%乙醇和100%乙醇。

            14.  于空氣中干燥切片后，經(jīng)放射自顯影檢測(cè)雜交的探針。

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