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            深圳市安培生物科技有限公司
                                                                        
            
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            血清系列
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            支原體清除
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            細(xì)胞凍存
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            實(shí)驗(yàn)耗材
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            分子試劑
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            細(xì)胞增殖與凋亡
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            Biozellen系列
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            培養(yǎng)基
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            ELISA試劑盒
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            TOYOBO（東洋紡）
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            ZYMO RESEARCH
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            Greiner（格瑞納）
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            IKA（艾卡）
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            化學(xué)發(fā)光底物（ECL）
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            PROSPEC系列
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            Epigentek系列
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            微生物檢測
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            細(xì)胞生物學(xué)
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            Corning康寧
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            解離試劑
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            細(xì)胞類-實(shí)驗(yàn)耗材
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            原代細(xì)胞
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            植物檢測系列試劑盒
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            SERANA
            
											
            
											
            
																						 												BSA
											 																						
            
											
            
																					
            
											
            細(xì)胞系
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            生化試劑盒
            
											
            
											
            
																						
            
											
            
																					
            
											
            環(huán)境檢測系列試劑盒（AKEN）
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            類器官培養(yǎng)
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            緩沖器和解決方案
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            生物三凝膠基質(zhì)
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            細(xì)胞因子分子
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            生物樣本庫
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            蛋白研究系列
            
											
            
											
											
            
																																						

							
            
                            						    
                            						
            



						



            
					
            
						
            混合淋巴細(xì)胞增殖
            
						
            
							時間：2023/1/11閱讀：1333
							
            
							
				
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            簡介
            混合淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)也稱混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)（MLC）或稱混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)（MLR），常用于器-官-移-植前的組織配型，以測定受體和供體主要組織相容性抗原（HLA 抗原）相容的程度。
            材料與儀器
            器材：細(xì)胞培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)板、吸管等、CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱、超凈臺。
            試劑：
            ① 10％FCS-RPMI 1640 培養(yǎng)基 ;
            ② 細(xì)胞 DCs 細(xì)胞、反應(yīng)細(xì)胞、外周血單個核細(xì)胞。
            ③ 3 H-TdR 工作液

            步驟
            混合淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)的基本過程可分為如下幾步：
            （一）刺激細(xì)胞（DCs）的制備
            A. 取健康志愿者肝素抗凝的外周血，淋巴細(xì)胞分離液分離單個核細(xì)胞
            B. 以 10％ FCS-RPMI 1640 懸浮細(xì)胞置培養(yǎng)瓶中，37℃、5％ CO2 培養(yǎng) 2 小時，輕輕翻過培養(yǎng)瓶，棄掉培養(yǎng)上清，將非貼壁細(xì)胞棄掉，即得貼壁的單核細(xì)胞
            C. 補(bǔ)加 10％ FCS-RPMI 1640 同時加入 20 ng/ml 的 hGM-CSF，500 IU/ml 的 IL-4，培養(yǎng)至第 7 天，收集懸浮細(xì)胞，即為 DCs
            D. 刺激細(xì)胞經(jīng) 25 μg/ml 的絲-裂-霉-素 C 或 2000 rad y-射線照射處理使刺激細(xì)胞失去增殖能力。
            （二）反應(yīng)細(xì)胞的制備
            A 取健康人外周血制備單核細(xì)胞，PBS 洗 3 次后，37℃、5％ CO2 貼壁 2 小時，收集懸浮細(xì)胞，作為反應(yīng)細(xì)胞
            B 以 RPMI 1640 培養(yǎng)液重懸，調(diào)整細(xì)胞濃度至 1x106 個/ml。
            （三）混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)
            A 將刺激細(xì)胞調(diào)整濃度分別為 1x106、5x105、2x10、1x105、5x104 個/ml， 10％FCS-RPMI 1640 培養(yǎng)于 96 孔培養(yǎng)板中，每濃度設(shè)立 3 孔，100μL/孔
            B 將反應(yīng)細(xì)胞濃度按 1x106 個/ml 每孔分別加入上述各孔中，100μl/孔
            C 同時設(shè)立刺激細(xì)胞對照組（不同濃度刺激細(xì)胞 100μl＋培養(yǎng)液 100μl）和反應(yīng)細(xì)胞對照組（反應(yīng)細(xì)胞 100μl＋培養(yǎng)液 100μl）
            D 37℃，5％ CO2 培養(yǎng) 5 天后，3 H-TdR 摻入率檢測反應(yīng)細(xì)胞的增殖水平。

            注意事項
            1. 實(shí)驗(yàn)中注意無菌操作
            2. 如作單向混合淋巴細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，則刺激細(xì)胞接受照射劑量要準(zhǔn)確，使細(xì)胞暫時存活，但失去增殖的能力。

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