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            深圳市安培生物科技有限公司
            中級(jí)會(huì)員 | 第5年

            19126518388

            血清系列
            細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            支原體清除
            細(xì)胞凍存
            實(shí)驗(yàn)耗材
            分子試劑
            細(xì)胞增殖與凋亡
            Biozellen系列
            培養(yǎng)基
            ELISA試劑盒
            TOYOBO(東洋紡)
            ZYMO RESEARCH
            Greiner(格瑞納)
            IKA(艾卡)
            化學(xué)發(fā)光底物(ECL)
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            Epigentek系列
            微生物檢測(cè)
            細(xì)胞生物學(xué)
            Corning康寧
            解離試劑
            細(xì)胞類-實(shí)驗(yàn)耗材
            原代細(xì)胞
            植物檢測(cè)系列試劑盒
            SERANA
            BSA
            細(xì)胞系
            生化試劑盒
            環(huán)境檢測(cè)系列試劑盒(AKEN)
            類器官培養(yǎng)
            緩沖器和解決方案
            生物三凝膠基質(zhì)
            細(xì)胞因子分子
            生物樣本庫(kù)
            蛋白研究系列

            單鏈 cDNA 的合成

            時(shí)間:2023/4/21閱讀:1144
            分享:

            材料與儀器

            步驟

            一、材料

            1. 緩沖液、溶液和試劑

            去除 RNA 酶的雙蒸水

            10XRT-PCR 緩沖液(去除 RNA 酶的雙蒸水,100 mmol/LTris-HCl、pH8.3,500 mmol/LKC1,15 mmol/LMgCl2)

            2. 酶和酶緩沖液

            MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(100~200U/ul)

            SUPERaseINRNA 酶抑制劑(20U/ul;Ambion)

            3. 核酸和寡核苷酸

            dNTP 混合物(10 mmol/L,包含所有四種 dNTP)

            隨機(jī)引物(5umol/L)

            總 RNA(達(dá)到 2.5ug)

            4. 實(shí)驗(yàn)器材

            薄壁的 PCR 管

            二、方法

            1. 在冰上加 2ul50umol/L 的隨機(jī)引物到薄壁的 PCR 管中(一個(gè)反應(yīng)一管)。

            2. 加入 2.5ug 的總 RNA。

            3. 加入 4ul 的 10 mmol/LdNTP 混合物。

            4. 添加去除 RNA 酶的雙蒸水(RNaSe-freeH20),使體積達(dá)到 16ul。

            5.70°C 加熱 10min, 變性二級(jí)結(jié)構(gòu),然后立即放在冰上。

            6. 加 2ul 的 10XRT-PCR 緩沖液。

            7. 加1ul 的 20U/ulSUPERaselN。

            8. 加1ul 的 100~200U/ulMMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶。

            9.42°C 溫浴 1h。

            10.95°C 加熱10min, 滅活逆轉(zhuǎn)錄酶。

            11. 繼續(xù)擴(kuò)增步驟或停止反應(yīng),-2°C 儲(chǔ)存。


            深圳安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實(shí)力、壹流的經(jīng)營(yíng)管理水平和完善的市場(chǎng)銷售體系的生物高科技企業(yè)??偛吭O(shè)在廣東,服務(wù)面向全國(guó)。安培生物集進(jìn)口試劑、實(shí)驗(yàn)室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開(kāi)發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司,旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供壹流的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號(hào)傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線,在各個(gè)領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供世界前沿水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品,安培生物致力于為廣大的科研機(jī)構(gòu)、高等院校等優(yōu)質(zhì)客戶提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)。


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