任何一個抗體藥物的開發(fā)和生產(chǎn)都是從細(xì)胞株開始的，細(xì)胞建庫是細(xì)胞株管理的關(guān)鍵一環(huán)，其應(yīng)在符合中國現(xiàn)行《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的條件下制備。目前，細(xì)胞庫機(jī)構(gòu)或者研究院都采用三級細(xì)胞庫管理模式，即：原始細(xì)胞庫(PCB)，主細(xì)胞庫(MCB)，工作細(xì)胞庫(WCB)。在某些特殊情況下，也可采用細(xì)胞種子和主細(xì)胞庫二級管理，但需要得到國務(wù)院藥品監(jiān)督部門的批準(zhǔn)。三級細(xì)胞庫的建立可為生物制品的生產(chǎn)提供檢定合格、質(zhì)量相同、能持續(xù)穩(wěn)定傳代的細(xì)胞，灌裝設(shè)備AbioFill V100可通過自動化操作，輕松實(shí)現(xiàn)大批量細(xì)胞灌裝。

 

　　上期給大家分享了AbioFill V100可用于MSC細(xì)胞的自動化灌裝【細(xì)胞灌裝】AbioFill V100助力MSC細(xì)胞自動化灌裝，今天給大家從用戶角度分享AbioFill V100如何自動化灌裝CHO細(xì)胞，助力細(xì)胞株建庫，并多維度評估設(shè)備灌裝CHO細(xì)胞后的體積、密度、活率等參數(shù)與手動灌裝相比的優(yōu)勢。

　　  01  　實(shí)驗(yàn)材料：

　　細(xì)胞：CHO細(xì)胞

　　凍存液：培養(yǎng)基+DMSO

　　凍存管：Corning 430659(2ml,Ex)

　　程序凍存盒等

　　  02  　儀器設(shè)備：

　　灌裝系統(tǒng)：AbioFill V100細(xì)胞灌裝系統(tǒng)

　　  03  　實(shí)驗(yàn)過程

　　(1)參數(shù)設(shè)置

　　灌注模式：開蓋-灌注-封蓋

　　灌注流速：350μL/s

　　灌注體積：1000μL

　　(2)安裝一次性灌裝管

　　采用CPC快接頭將一次性灌裝管與裝有樣品的搖瓶進(jìn)行對接，避免操作過程中細(xì)胞樣品被污染。

　　(3)凍存管編號并安裝

　　為后續(xù)分析所取樣品具有代表性，對凍存管進(jìn)行編號，共灌注120支，選取每板A1、D6孔進(jìn)行測試。

 

　　  04  　結(jié)果分析

　　本實(shí)驗(yàn)采用手動灌裝細(xì)胞為對照，在灌注前對細(xì)胞樣品進(jìn)行計(jì)數(shù)，了解其活率密度，在灌注結(jié)束后每板選取A1、D6孔(共10支樣品)進(jìn)行活率、密度以及體積測試。活率及密度測試為了評估設(shè)備對細(xì)胞樣品是否存在損傷，而體積測試是為了評估設(shè)備的灌注精準(zhǔn)度。灌注后的樣品按照常規(guī)方式進(jìn)行凍存，一周后，將樣品進(jìn)行復(fù)蘇，復(fù)蘇后進(jìn)行活率密度計(jì)數(shù)(數(shù)據(jù)未展示)，并在復(fù)蘇后第三天再進(jìn)行活率密度測試并計(jì)算倍增時間(DT)，評估設(shè)備是否影響細(xì)胞的生長狀態(tài)。

手動與設(shè)備法灌注前后及復(fù)蘇D3細(xì)胞密度、活率、體積與DT對比表

 

　　從結(jié)果可以看出灌注前后：AUTO(設(shè)備灌裝)和Manual(手動灌裝)組內(nèi)無差異，組間相比AUTO組細(xì)胞密度、灌裝體積的CV值比Manual組低；兩組細(xì)胞活率CV值差異較小。在復(fù)蘇D3：AUTO和Manual組間相比，AUTO組密度的CV值比Manual組低10.9%；活率CV值比Manual組低4.5%；從DT上看AUTO組和Manual組無明顯差異，證實(shí)灌裝過程對細(xì)胞無損傷，不會改變細(xì)胞增殖規(guī)律，灌裝過程均無染菌、總體上結(jié)果表現(xiàn)良好。本次測試表明灌注前后、凍存復(fù)蘇后AUTO表現(xiàn)均優(yōu)于手動組。

　　當(dāng)然，AbioFill V100除了可進(jìn)行高產(chǎn)、穩(wěn)定的三級細(xì)胞株建庫的灌裝，還能應(yīng)用于以下場景：

　　   三級菌株庫與cGMP級別的質(zhì)粒庫/病毒載體庫的灌裝

　　質(zhì)粒是細(xì)胞、基因和疫苗治療的重要工具，建立穩(wěn)定的三級菌株庫對于質(zhì)粒的生產(chǎn)至關(guān)重要。在基因與細(xì)胞治療領(lǐng)域，目前大都采用瞬轉(zhuǎn)技術(shù)，需要大量的GMP級別的質(zhì)粒；在治療性藥物、疫苗等研究中，質(zhì)?？梢宰鳛榻K產(chǎn)品注入人體內(nèi)，進(jìn)行目標(biāo)基因的表達(dá)。AbioFill V100可以實(shí)現(xiàn)三級菌株庫和質(zhì)粒庫高效的無菌灌裝。

 

　　   生物制劑的凍存管灌裝，如細(xì)胞因子、病毒液等

　　生物制劑因具有生物活性所以在保存中有嚴(yán)格的溫度要求，因此灌裝環(huán)節(jié)尤為重要。制劑通常采用體積較小、與使用劑量匹配的凍存容器，如不同規(guī)格的凍存管等。