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熒光抗體操作過(guò)程為何要避光？
熒光抗體操作過(guò)程為何要避光？
(1)生物化學(xué)反應(yīng)需要酶的催化作用，所以熒光素在熒光素酶和ATP等物質(zhì)的參與下可進(jìn)行反應(yīng)發(fā)出熒光.ATP是生命活動(dòng)能量的直接來(lái)源，發(fā)光強(qiáng)度與ATP的含量成正比，所以根據(jù)發(fā)光強(qiáng)度可以計(jì)算出生物組織中ATP的含量。
(2)影響酶活性的外界因素有溫度和pH，其中維持溶液pH的相對(duì)穩(wěn)定時(shí)常常使用緩沖液.分光光度計(jì)反應(yīng)室內(nèi)發(fā)生的能量轉(zhuǎn)換是ATP中活躍的化學(xué)能轉(zhuǎn)化為光能。
(3)熒光素酶濃度不同，但發(fā)光強(qiáng)度相同，由于受ATP數(shù)量限制，發(fā)光強(qiáng)度也不再增加。
(4)每個(gè)細(xì)菌細(xì)胞中ATP的含量大致相同且相對(duì)穩(wěn)定，可以根據(jù)樣品中細(xì)菌的ATP總含量，測(cè)算出細(xì)菌的數(shù)量。