1. 預期用途

材料 18/118 是凍干、純化的基因組 DNA (gDNA)從 HCT 15 人細胞系中提取。該材料與 PIK3CA c.1633G>A (E545K) 相關的共有變異百分比，以及每個二倍體人類基因組質量的共有變異和總 PIK3CA 拷貝數?？梢酝ㄟ^應用計算（參見附錄 I）來稀釋材料，以產生 PIK3CAc.1633G>A (E545K) 變體百分比范圍內的標準品。該材料旨在用作校準二級標準、試劑盒和測定的主要標準。該材料不用作運行控制。該材料經過外部實驗室測試，表明適合作為下一代測序 (NGS) 和數字 PCR (dPCR) 的標準。除了 PIK3CA c.1633G>A (E545K) 臨床相關變體外，該材料還包含可用于 NGS 檢測驗證的非臨床相關變體（參見附錄 II）。該材料由世界衛(wèi)生組織 (WHO) 生物標準化專家委員會于 2019 年制定，作為 WHO 第一個 HCT 15 癌癥基因組國際標準，NIBSC 材料代碼 18/118。

2. 注意

NIBSC 18/118 HCT 15 癌癥基因組(標準品) 不適用于人類食物鏈中的人類或動物。

該制劑含有人類來源的材料，經血清學檢測發(fā)現 HIV 1 和 2 Ab/Ag 檢測和 HBsAg（Hep b 表面抗原）陰性，NAT（核酸檢測）檢測發(fā)現 HCV 陰性。但是，不能消除活病毒存活的可能性。與所有生物來源的材料一樣，這種制劑應被視為對健康有潛在危害。應根據您自己實驗室的安全程序使用和丟棄它。此類安全程序應包括戴防護手套和避免產生氣溶膠。打開安瓿或小瓶時應小心謹慎，以免割傷。

3. 單元

該材料在一項涉及 35 個實驗室和 38 種測試方法的國際合作研究中進行了測試。從 NGS 和 dPCR 獲得基因型和共有變異百分比（表 1）。最終用戶能夠使用基于變體和總基因拷貝數全二倍體人類基因組的稀釋公式進一步稀釋材料（使用野生型材料 18/164，或校準到材料 18/164 的另一種野生型基因組 DNA）

質量，以在較低的一致變異百分比范圍內達到進一步的標準，從該范圍內可以進行測定校準見第 7 節(jié)。

4. 內容

生物材料原產國：英國。

編碼安瓿含有大約 5 µg 從人類細胞系中提取的凍干純化基因組 DNA。使用“鹽析"方法提取 gDNA，并在冷凍干燥前在 Tris-EDTA 緩沖液 5mg/ml 海藻糖中稀釋。

5. 存儲

NIBSC 18/118 HCT 15 癌癥基因組(標準品) 將所有未開封的凍干材料安瓿存放在 - 或以下。

請注意：由于凍干材料固有的穩(wěn)定性，NIBSC 可能會在環(huán)境溫度下運輸這些材料。

6. 開瓶指南

DIN 安瓿瓶有一個“易開"顏色的壓力點，窄的安瓿桿在此與較寬的安瓿瓶主體相連。各種類型的安瓿破碎機可商購獲得。要打開安瓿，輕輕敲擊安瓿以收集底部（標記）端的材料，并按照安瓿破碎器隨附的制造商說明進行操作。

7. 材料的使用

在重新配制之前，不應嘗試稱量凍干材料的任何部分

a。如上文第 6 節(jié)所述打開安瓿瓶。

b。在室溫下用 100μl 無核酸酶水復溶凍干材料。

C。使用移液器將樣品轉移到無核酸酶管中，確保收集最大可用量。

d。讓材料在室溫下復溶 1 小時，然后用移液管充分混合。 1x Tris-EDTA 緩沖液中的 DNA 濃度現在約為 50ng/µl，但建議在使用前使用自己的定量方法進行確認。不必擔心材料中可能出現的白色斑點。

e.這種變體材料可以與材料 18/164（野生型）結合以產生任何選擇的變體百分比的標準

F。將所需的量添加到您的檢測中。材料可以進一步稀釋（用無核酸酶水或合適的緩沖液），以達到適合您檢測的 DNA 濃度。

G。應在同一測定中分析初級和二級標準，以將值分配給二級標準。