ERM-AD624 李斯特菌單核細胞基因瓊脂糖插頭每個單元包括一個小瓶，包含一個瓊脂糖塞，為PFGE嵌入未消化的單核增生李斯特菌DNA。這些插頭是由歐盟委員會的聯(lián)合研究中心負責生產(chǎn)和認證的。以單核增生李斯特菌H2446作為生產(chǎn)塞的起始原料。這些插塞儲存在含有TRIS-EDTA緩沖溶液的微瓶中。

使用說明

ERM-AD624 李斯特菌單核細胞基因瓊脂糖插頭用于質(zhì)量控制和/或方法性能評估。與任何參考材料一樣，它可以用于建立控制圖或驗證研究。請注意，該材料的認證值是使用如下所述的PFGE李斯特菌協(xié)議獲得的。遵循不同的PFGE協(xié)議可能會產(chǎn)生不同的頻帶模式，從而產(chǎn)生不同的結(jié)果。

限制前孵育

-將塞放于100µL 1倍濃縮限制性內(nèi)切酶(RE)緩沖溶液中，37±1°C孵育10 min。

消化瓊脂糖塞

-抽吸RE緩沖液，加入含有5個單位AscI酶的100µL RE緩沖液，確保塞*浸泡。-在37±1°C的干浴中孵育4小時。

PFGE消化片段

-將0.5x TBE緩沖溶液(44.5mM三硼酸鹽；1mMEDTA，pH 8.3)倒入電泳室，打開蠕動泵，將冷水機設(shè)置為14°C。-用0.5x TBE制備1%(w/v)海帶金瓊脂糖(SKG)瓊脂糖，并保持在50oC直到使用。-吸入酶溶液，在試管中加入200µL 0.5x TBE，室溫孵育5 min。-將梳子放在臺頂，并將塞子裝入梳子齒的底部。-將塞子放在梳子上干燥3 min，用一滴1%(w/v)SKG瓊脂糖溶液密封。-將梳子放置在凝膠托盤中，以確保插頭的下邊緣正確地與框架對齊。-將瓊脂糖溶液小心地倒入凝膠托盤中，讓凝膠凝固30 min。-取出梳子，用1%(w/v)SKG瓊脂糖溶液填充孔，并使其凝固。

儲存

ERM-AD624 李斯特菌單核細胞基因 瓊脂糖插頭材料應儲存在4±3°C。然而，歐洲委員會不能對材料在客戶的場所儲存期間發(fā)生的變化負責，特別是對打開的樣品。

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