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C18液相色譜柱的使用注意簡(jiǎn)述
閱讀：1263 發(fā)布時(shí)間：2022-8-15
在選用色譜柱時(shí)，應(yīng)充分考慮所分析樣品的極性大小、化合物的種類(lèi)數(shù)量、結(jié)構(gòu)特征。根據(jù)化合物的性質(zhì)，選擇合適的色譜柱和分析條件。不同類(lèi)型的色譜柱使用的流動(dòng)相不同，使用錯(cuò)誤的流動(dòng)相會(huì)降低柱效，損傷柱子。如分析極性較大的多糖類(lèi)成分，應(yīng)當(dāng)采用親水性的反相填料。對(duì)于*次使用的色譜柱，還應(yīng)按照廠(chǎng)家的出廠(chǎng)說(shuō)明對(duì)色譜柱進(jìn)行低流速的沖洗活化，活化后的色譜填料共價(jià)鍵鍵合力增強(qiáng)，柱效提高，壽命延長(zhǎng)。
在使用液相色譜C18儀柱過(guò)程中，須注意以下事項(xiàng)：
1、新C18色譜柱在使用前，須先用甲醇或乙腈試劑以20倍柱體積低流速?zèng)_洗，作用是使固定相能充分潤(rùn)濕、碳鏈?zhǔn)嬲?，使色譜柱的性能達(dá)到好狀態(tài)。具體操作是，將配制好65%的乙腈/水沖洗后，把色譜柱進(jìn)口端連接在色譜儀上，出口端放空（不可連上檢測(cè)器，以免污染了檢測(cè)器），以0.1ml/min~0.5ml/min的低流速將色譜柱中的清稀溶液吹干，過(guò)20分鐘后再接上檢測(cè)器，以1.0ml/min的流速，繼續(xù)沖洗2~8小時(shí)；
2、液相色譜儀檢測(cè)分析樣品完畢后，須沖洗色譜柱。尤其是流動(dòng)相中含有酸或鹽時(shí)，需將色譜柱中的酸或鹽沖洗干凈，通常建議用10%甲醇水沖洗20倍柱體積；
3、若色譜柱處于長(zhǎng)期閑置狀態(tài)時(shí)，要將色譜柱沖洗，建議沖洗3-4小時(shí)以上，后保存在純有機(jī)試劑或高比例的有機(jī)試劑溶液（如90%甲醇水）中；
4、由于C18柱的固定相疏水性較強(qiáng)，在使用過(guò)程中盡量不要使用高水相條件，若水相比例過(guò)高易引起固定相疏水塌陷，引起柱效迅速下降，甚至造成不可逆的負(fù)面影響；由于碳載量高，表現(xiàn)尤為明顯，建議使用過(guò)程中水相比例不超過(guò)90%；
5、色譜柱壓力升高、柱性能下降：通常為色譜柱被污染，對(duì)色譜柱進(jìn)行再生處理可恢復(fù)部分柱效；
6、色譜柱壓力驟升：通常由鹽析出或篩板堵塞引起，若是鹽析出，用10%甲醇水低流速?zèng)_?洗至壓力恢復(fù)即可；若判斷并非鹽析出，以純甲醇或10%甲醇水為流動(dòng)相反沖色譜柱（將色譜柱反接，不接檢測(cè)器），若反沖半小時(shí)仍無(wú)效果則說(shuō)明反沖無(wú)效，需尋找其他原因。