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            猴痘病毒(Pox)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

            閱讀:1273      發(fā)布時間:2023-03-08
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            猴痘病毒(Pox)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書


            本試劑盒僅供研究使用。

                                                                                 96T

             

            使用目的:

            本試劑盒用于測定猴子血清、血漿及相關液體樣本中猴痘病毒(Pox)表達

            實驗原理

            本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中猴痘病毒(Pox)表達。用純化的猴痘病毒(Pox)抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中猴痘病毒(Pox)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標記的猴痘病毒(Pox)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹di洗滌后加底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中猴痘病毒(Pox)的存在與否。

            試劑盒組成

            1

            30倍濃縮洗滌液

            20ml×1

            7

            終止液

            6ml×1

            2

            酶標試劑

            6ml×1

            8

            陽性對照

            0.5ml×1

            3

            酶標包被板

            12孔×8

            9

            陰性對照

            0.5ml×1

            4

            樣品稀釋液

            6ml×1

            10

            說明書

            1

            5

            顯色劑A

            6ml×1

            11

            封板膜

            2 

            6

            顯色劑B

            6ml×1/

            12

            密封袋

            1

            標本要求

            1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

            2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

            操作步驟

             1.         編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)

             2.         加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,

             3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

             4.         配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

             5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

             6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

             7.         溫育:操作同3。

             8.         洗滌:操作同5

             9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

            10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

            11.     測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

            計算和結(jié)果判定:

              試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.20

              臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

              陰性判定:樣品OD< 臨界值(CUT OFF)者為猴痘病毒(Pox)陰性

              陽性判定:樣品OD臨界值(CUT OFF)者為猴痘病毒(Pox)陽性

            。

            注意事項

            1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。

            2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

                 3.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。

            4.  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

                 5.底物請避光保存。

                 6.試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm

            7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須注意安全。


            保存條件及有效期

            1.試劑盒保存:2-8

            2.有效期:6個月

            提供商

            優(yōu)利科(上海)生命科學有限公司

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            9次

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