甜菜堿（Betaine）含量試劑盒說(shuō)明書
微量法100T/96S
注 意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
甜菜堿是一種廣泛分布于動(dòng)植物及微生物體內(nèi)的季銨型水溶性生物堿，是生物體內(nèi)膽堿的氧化產(chǎn)物，可以增強(qiáng)免疫力、降血脂、抗氧化、抗腫瘤，并可作為甲基供體，參與促進(jìn)動(dòng)物蛋白質(zhì)和脂肪代謝、增進(jìn)食欲、緩和應(yīng)激、調(diào)節(jié)滲透壓、穩(wěn)定維生素等多種生物作用，在化工、醫(yī)藥、食品添加劑等領(lǐng)域有較廣泛的應(yīng)用。
測(cè)定原理：
甜菜堿在強(qiáng)酸條件下和雷氏鹽發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生沉淀，沉淀用丙酮溶解形成紅色溶液，在525nm處有特征吸收峰，測(cè)定525nm處的吸光值，可計(jì)算得樣品的甜菜堿含量。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
天平、離心機(jī)、酶標(biāo)儀、96孔板、yi醚、鹽酸、丙酮和蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液：液體30mL×1瓶 ，4℃保存；
試劑一：粉劑×3瓶，4℃保存；臨用前根據(jù)用量配制，每瓶加20mL蒸餾水溶解，加390μL濃鹽酸調(diào)pH為1。
試劑二：99%yi醚，自備。取無(wú)水yi醚59.4mL，加入蒸餾水0.6mL，混勻。
試劑三：70%丙酮，自備。（易揮發(fā)，根據(jù)用量自備，丙酮：蒸餾水=7:3）。
甜菜堿提取：
取烘干后過(guò)40目篩的樣品約0.02g，加0.8mL水，置于60℃提取30min，期間不斷震蕩。再加入200µL提取液，混勻后10000g，25℃，離心10min，取上清液。
測(cè)定操作表：
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至525nm。
2、 操作表
空白管 | 測(cè)定管 | |
上清液（µL） | 300 | |
蒸餾水（µL） | 300 | |
試劑一（µL） | 500 | 500 |
充分混勻，4℃中反應(yīng)2h，12000rpm，25℃，離心10min，棄上清 | ||
試劑二（µL） | 500 | 500 |
混勻，12000rpm，25℃，離心10min，棄上清。置于通風(fēng)櫥使殘余yi醚自然揮發(fā)干凈 | ||
試劑三（µL） | 300 | 300 |
震蕩使沉淀充分溶解，取200µL于96孔板，記錄標(biāo)準(zhǔn)管和測(cè)定管525nm處吸光值A測(cè)定與A空白。ΔA=A測(cè)定管-A空白管。 | ||
甜菜堿含量計(jì)算公式：
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 0.502x + 0.0057，R2 = 0.9993；x為甜菜堿濃度（mg/mL），y為吸光值。
甜菜堿含量（mg/g 干重）=（ΔA-0.0057）÷ 0.502× V標(biāo)準(zhǔn)÷(V樣÷V樣總×W)
=1.99×（ΔA-0.0057）÷W
V標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)品體積，0.3mL；V樣：反應(yīng)中樣本體積，0.3mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣本質(zhì)量，g
注意事項(xiàng)：
1、 試劑一配制時(shí)pH嚴(yán)格控制為1，否則會(huì)導(dǎo)致反應(yīng)不wan全，配制后4℃只能穩(wěn)定幾個(gè)小時(shí)，配制后盡快使用。
2、 試劑二與試劑三對(duì)呼吸道有一定的刺激，請(qǐng)做好防護(hù)工作。
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優(yōu)利科（上海）生命科學(xué)有限公司 | 下載次數(shù) |
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