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            首頁   >>   資料下載   >>   土壤α-葡萄糖苷酶(Solid-α-Glucosidase,S-α-GC)試劑盒說明書

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            土壤α-葡萄糖苷酶(Solid-α-Glucosidase,S-α-GC)試劑盒說明書

            閱讀:372      發(fā)布時間:2023-09-20
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            土壤α-葡萄糖苷酶(Solid-α-Glucosidase,S-α-GC)試劑盒說明書

                                                     微量法100/48

             

               正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

            測定意義:                           

            S-α-GC能夠催化水解芳基或烴基與糖基原子團之間的糖苷鍵生成葡萄糖,是纖維素分解酶系中重要組成成分之一,在土壤微生物的糖類代謝方面具有重要生理功能。

             

            測定原理:

            S-α-GC能夠催化對-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷生成對-硝基苯酚,后者在400nm有特征光吸收。

             

            自備用品:

            可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、甲苯(不允許快遞)和蒸餾水。

             

            試劑組成和配制:

            試劑一:甲苯5mL×1瓶,4保存;(自備)

            試劑二:粉劑×1瓶,-20保存;臨用前加入10mL蒸餾水,充分溶解備用,用不完的試劑仍-20保存;

            試劑三:液體20mL×1瓶,4保存;

            試劑四:液體15mL×1瓶,4保存;

             

            樣品處理:

            新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干,過30~50目篩。

             

            測定步驟:

            1、   分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至400nm,蒸餾水調(diào)零。

            2、  加樣表

            試劑名稱

            測定管

            對照管

            風(fēng)干土樣(g

            0.02

            0.02

            試劑一(μL

            10

            10


            室溫振蕩混勻15min

            90℃振蕩混勻15min

            試劑二(μL

            130


            蒸餾水


            130

            試劑三(μL

            160

            160

            混勻, 37振蕩反應(yīng)1h,90水浴5min(蓋緊,防止水分散失),流水冷卻,

            10000g 25離心10min,取上清液(在EP管或96孔板中加入下列試劑)

            上清液μL

            70

            70

            試劑四μL

            130

            130

            充分混勻,室溫靜置2min后, 400nm處測定吸光值A,計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管設(shè)

             

            一個對照管。

             

            S-α-GC活力計算:

            a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

            標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 0.0032x -0.0027;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μmol/L),y為吸光值。

            單位的定義:每天g土樣中產(chǎn)生1 μmol-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。

            S-α-GC活力(μmol/d/g 土樣)= (ΔA+0.0027) ÷0.0032×V反總÷W÷T =112.5×(ΔA+0.0027)

            T:反應(yīng)時間,1h=1/24d; V反總:反應(yīng)體系總體積:3×10-4 L;W:樣本質(zhì)量,0.02g。

             

            b.96孔板測定的計算公式如下

            標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 0.0016x -0.0027;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μmol/L),y為吸光值。

            單位的定義:每天g土樣中產(chǎn)生1 μmol-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。

            S-α-GC活力(μmol/d /g 土樣)= (ΔA+0.0027) ÷0.0016×V反總÷W÷T =225×(ΔA+0.0027)

            T:反應(yīng)時間,1h=1/24d; V反總:反應(yīng)體系總體積:3×10-4 L;W:樣本質(zhì)量,0.02g


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