土壤亮氨酸氨基肽酶（Solid-Leucine Aminopeptidase,S- LAP）試劑盒說明書
微量法100管/48樣
注 意 ：正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
S-LAP是一類能水解肽鏈N-末端為亮氨酸的酶，由土壤微生物分泌。S-LAP活性變化與機體某些病理狀態(tài)密切相關(guān)。
測定原理：
S-LAP分解L-亮氨酰對硝基苯胺生成對硝基苯胺，后者在405nm有最大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算S-LAP活性。
自備用品：
酶標儀/可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96孔板/微量石英比色皿和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一：液體35mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；
S-LAP測定步驟：
1、 分光光度計或酶標儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至405nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 在試劑二瓶中加入15mL試劑一充分溶解（如較難溶解，可60℃水浴加熱約30min促進溶解）；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
3、 操作表
試劑名稱 | 對照管 | 測定管 |
新鮮土樣（g） | 0.05 | 0.05 |
試劑一（μL） | 300 | |
試劑二（μL） | 300 |
混勻， 37℃振蕩反應(yīng)1h后，8000g 4℃離心10min，S-LAP活力單位的計算：
取200μL上清液于微量石英比色皿或96孔板中，405nm處測定吸光值A(chǔ)，計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管設(shè)一個對照管。
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下：
單位的定義：每天每g土樣每天生成1 μmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。
S-LAP（μmol/d /g 土樣）＝ΔA×V反總÷（ε×d）×106÷W÷T=14.8×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，3×10-4 L；ε：對硝基苯胺摩爾消光系數(shù)，9.72×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，
1cm；T：反應(yīng)時間，1h=1/24d； W：樣本質(zhì)量，0.05g。
b.用96孔板測定的計算公式如下：
單位的定義：每天每g土樣每天生成1 μmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。
S-LAP（μmol/d /g 土樣）＝ΔA×V反總÷（ε×d）×106÷W÷T=29.6×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，3×10-4 L；ε：對硝基苯胺摩爾消光系數(shù)，9.72×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，0.5cm；T：反應(yīng)時間，1h=1/24d； W：樣本質(zhì)量，0.05g。
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