土壤錳過(guò)氧化物酶（Soil manganese peroxidase，S-Mnp）試劑盒說(shuō)明書
微量法100T/48S
注 意 ：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
錳過(guò)氧化物酶（EC1.11.1.13）是一種含亞鐵血紅素的過(guò)氧化物酶，主要存在于擔(dān)子菌中，屬于木質(zhì)素降解酶系，能有效的降解木質(zhì)素及廢水和土壤中比較難降解的氯化物，疊氮化合物、DTT，多環(huán)芳烴等。
測(cè)定原理：
錳過(guò)氧化物酶在Mn2+存在的條件下，將愈創(chuàng)木酚氧化為四鄰甲氧基連酚，在465nm有特征吸收峰。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
天平、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、震蕩儀、甲苯。
試劑組成和配制：
試劑一：液體12mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體2mL×1支，4℃保存。
試劑三：液體4mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑四：液體2mL×1支，4℃保存。
樣品處理：
新鮮土樣風(fēng)干，過(guò)30-50目篩。
測(cè)定操作：
對(duì)照管 | 測(cè)定管 | |
土樣（mg） | 40 | 40 |
甲苯（μL） | 30 | 30 |
25℃，靜置15min | ||
試劑一（μL） | 140 | 120 |
試劑二（μL） | 20 | |
試劑三（μL） | 40 | 40 |
試劑四（μL） | 20 | 20 |
充分混勻，于30℃震蕩反應(yīng)3h，于10000rpm，4℃離心10min，取150μL于微量石英比色皿/96孔板，測(cè)定465nm處吸光值，記為A對(duì)照管和A測(cè)定管，△A=A測(cè)定管- A對(duì)照管 | ||
酶活計(jì)算公式：
a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
酶活性定義：每克土壤每天氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
S-MnP活性（nmol/d /g 土樣）= 
×V反總÷W÷T= 66.4×△A÷W
ε：愈創(chuàng)木酚摩爾消光系數(shù)：12100L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，3h
b. 用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
酶活性定義：每克土壤每天氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
S-MnP活性（nmol/d /g土樣）= ×V反總÷W÷T= 132.8×△A÷W
ε：愈創(chuàng)木酚摩爾消光系數(shù)：12100L/mol/cm；d：比色皿光徑，0.5cm；V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，3h
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WORD 文檔 |
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