土壤脫氫酶（Soil dehydrogenase, sDHA）試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法100T/96S
注 意 ：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
土壤脫氫酶(Soil dehydrogenase, sDHA)的活性可以反映土壤體系內(nèi)活性微生物量以及其對(duì)有機(jī)物的降解活性，可以作為土壤微生物的降解性能指標(biāo)。
測(cè)定原理：
氫受體2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑（2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride，TTC）在細(xì)胞呼吸過(guò)程中接受氫以后，被還原為三苯基甲鐟（Triphenyl Formazone, TF），在波長(zhǎng)485nm處有最大吸收峰，采用分光光度法于485nm測(cè)定其吸光值，即得土壤脫氫酶活性。
自備實(shí)驗(yàn)儀器及用品：
篩子、天平、恒溫培養(yǎng)箱或水浴鍋、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水、甲醇（不允許快遞，請(qǐng)用戶自備）。
試劑的組成和配制：
試劑一：粉劑×1瓶，使用前加10mL試劑二溶解，4℃避光保存（盡量現(xiàn)配現(xiàn)用）。
試劑二：液體20mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：甲醇，自備。
樣品處理：測(cè)定步驟和操作表：
新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干，過(guò)30~50目篩。
空白管 | 測(cè)定管 | |
樣品（g） | 0.05 | |
試劑一（μL） | 100 | |
試劑二（μL） | 100 | |
充分混勻，37℃培養(yǎng)24h | ||
試劑三（μL） | 900 | 900 |
振蕩1h，8000g，25℃，離心5min，取200μL上清于微量石英比色皿/96孔板，測(cè)定A485，△A=A測(cè)定-A空白管。空白管只要做一管。 | ||
脫氫酶活力計(jì)算：
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.0211x - 0.0312；R2 = 0.9988；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/mL），y為吸光值。
酶活單位定義：在37℃時(shí)，每克土壤樣品每天催化產(chǎn)生1μgTF為一個(gè)酶活性單位。
sDHA（μg/ d /g 土樣）=（△A+0.0312）÷ 0.0211×V反總÷W÷T= 47.39×（△A+0.0312）÷W
V反總：反應(yīng)總體積，1mL；T：培養(yǎng)時(shí)間，1d；W：樣品質(zhì)量，g
注意事項(xiàng)：
配制好的試劑一避光保存于4℃，最好在一周內(nèi)使用，若出現(xiàn)紅色，則不能使用。
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